• Среда для выделения стрептококков


    Селективный агар / бульон для стрептококков

    Streptococcus Selection Agar
    Селективный агар для стрептококков

    M304

    Streptococcus Selection Broth
    Селективный бульон для стрептококков

    M303

     

    Эти среды рекомендуют для селективного выделения и подсчета всех вариантов стрептококков, включая b-гемолитические группы А.

    Состав**:

    Ингредиенты

    М304
    грамм/литр

    М303
    грамм/литр

    Гидролизат казеина

    15,00

    15,00

    Папаиновый перевар соевой муки

    5,00

    5,00

    Глюкоза

    5,00

    5,00

    Натрия хлорид

    4,00

    4,00

    Натрия цитрат

    1,00

    1,00

    Натрия сульфит

    0,20

    0,20

    L-Цистин

    0,20

    0,20

    Натрия азид

    0,20

    0,20

    Кристаллический фиолетовый

    0,0002

    0,0002

    Агар-агар

    15,00

    Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

     

     

    ** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

    Приготовление:

    Размешать 45,6 г порошка М304 или 30,6 г порошка М303 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Если предполагается использовать среду в тот же день, автоклавирование не требуется. В противном случае стерилизовать автоклавированием при 0,9 атм (118°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.

    Предупреждение: Азид натрия имеет тенденцию к образованию взрывчатых соединений с металлами, поэтому рекомендуется использовать много воды для удаления остатков среды.

    Принцип и оценка результата:

    Данные среды основаны на прописи Pike (1) предложенной для селективного выделения стрептококков из различных материалов, особенно обильно контаминированных сопутствующей микрофлорой (2). Другими авторами (3) показана возможность использования этих сред для выделения b-гемолитических стрептококков группы А.

    Папаиновый перевар соевой муки, гидролизат казеина, соли и глюкоза служат источником необходимых питательных веществ для роста стрептококков. Азид и сульфит натрия подавляют рост грамположительных палочек, а кристаллический фиолетовый – рост стафилококков. Вместе с тем указанные ингибиторы в данных концентрациях не подавляют рост стрептококков, поэтому среды можно использовать для выделения и культивирования стрептококков в санитарно-эпидемиологических и клинических исследованиях. На этой среде активно подавляется рост колиформных бактерий, протеев, псевдомонад и бацилл, но некоторые стафилококки и пневмококки могут давать на ней рост. Все колонии стрептококков, выросшие на данной среде, нуждаются в дальнейшей идентификации.

    Контроль качества:

    Внешний вид порошка:

    Гомогенный сыпучий желтый порошок.

    Плотность готовой среды:

    Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М304).

    Цвет и прозрачность готовой среды:

    Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

    Кислотность среды:

    При 25°С водные растворы М304 (4,56% вес/об) или М303 (3,06% вес/об) имеют рН 7,4 ± 0,2.

    Культуральные свойства:

    Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

    Штаммы микроорганизмов (АТСС)

    Рост

    Streptococcus pyogenes (19615)

    Обильный

    Enterococcus faecalis (29212)

    Обильный

    Staphylococcus aureus (25923)

    Слабый или
    отсутствует

    Escherichia coli (25922)

    Слабый или
    отсутствует

    Bacillus subtilis (6633)

    Подавляется

    Pseudomonas aeruginosa (27853)

    Подавляется

    Ссылки:

    1. Pike R.M., 1945, Am. J. Hyg., 41:211.
    2. Facklam and Carly, 1985, Manual of Clinical Microbiology, Lennette and others (Eds.), 4th ed., ASM, Washington D.C.
    3. Welch D.F. et al, 1991, Am. J. Clin. Pathol., 95:587.

    Условия и сроки хранения:

    Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

     

    Выделение и идентификация культур стрептококков — Студопедия

    Таблица 6 - Экология и патогенные свойства стрептококков

    Лабораторная диагностика стрептококкозов

    Ранее в род Streptococcus включали пиогенные стрептококки, энтерококки и молочнокислые стрептококки, которые в настоящее время отнесены соот­ветственно в самостоятельные роды Streptococcus, Еnterococcus и Lactococcus. В данном разделе рассматриваются вопросы лабораторной диагностики болезней, вызываемых видами родов Streptococcus и Еnterococcus.

    Виды рода Streptococcus имеют клетки сферические или овальные, диа­метром 0,5-2 мкм, при росте в жидкой питательной среде клетки парные или в виде цепочек. Клетки грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, иногда имеют капсулу. Факультативные анаэробы, каталазоотрицательные, растут в диапазоне температур 25-45° С.

    Вид стрептококка Естественная среда обитания Вызываемая патология
    S. рneumoniае ' Верхние дыхательные пути Септицемия, воспаление суставов, при подостром течении пневмония, воспаление кишечника у телят, ягнят, реже у поросят
    S. руoqenes Верхние дыхательные пути Иногда маститы у коров, лимфан­гит жеребят
    S. equi sudsp. equi Миндалины лошадей Лошади - маститы, мыт
    S. equi sudsp . equisimilis Вагина и кожа лошадей Маститы, эндометриты лошадей
    S. equi zooepidemicus Слизистые и кожа свиноматок, овец, кур, вагина и кожа лошадей Крупный рогатый скот - маститы и метриты; свиньи — септицемия и артриты у 1-3-недельных поросят; ягнята- пневмонии; птица — септицемия; лошади - аборты, маститы, пневмонии
    S. agalactiae Молочные каналы Крупный рогатый скот, овцы, козы - маститы; собаки - септицемия щенков; кошки - маститы
    S. dysagalactiae Гениталии и носовая по­лость крупного рогатого скота, овец Крупный рогатый скот - маститы, эндометриты; ягнята - полиартриты
    S. dysagalactiae equisimilis Вагина и кожа лошадей Лошади - эндометриты, маститы
    S. porcinus Слизистые свиней Свиньи - лимфадениты поросят
    S. suis mun Носовая полость, минда­лины свиней Свиньи — артриты, менингиты, сеп­тицемия молодняка
    S. uderis 2 Миндалины, вагина, ко­жа крупного рогатого скота Крупный рогатый скот — маститы
    S. canis Слизистые, генитальный тракт плотоядных Плотоядные - септицемия новоро­жденных, поражения гениталиев, кожи
    S. bovis, S. equines 2 Кишечный тракт многих видов животных Возбудители оппортунистических инфекционных болезней

    Примечание к таблице 6.1)S. рneumoniае относят к группе «Стрептококки ротовой полости».


    2) S. uderis ,2 S. bovis, S. equines 2отнесены к группе «Другие стрептококки». Все остальные стрептококки классифицируют как «Гноеродные стрептококки».


    Виды рода Еnterococcus сходны со стрептококками по вышеперечисленным признакам, но температурный диапазон составляет 10-45° С, мо­гут расти при рН 9,6, концентрации NаС 16,5% и желчи 40%, обычно отно­сятся к серологической группе «В».

    Патогенные свойства и экология патогенных стрептококков представ­лены в табл. 6.

    Энтерококки (Е. faecalis, E. faecium, E. durans) обитают в кишечном тракте многих видов животных, могут быть причиной оппортунистических инфекций и септицемии у кур, маститов коров, инфекций мочевого тракта у собак, эндокардитов у ягнят и крупного рогатого скота.

    Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на результатах бактериологического исследования.

    Бактериологическое исследование. Для исследования на стрептококковую инфекцию животных в лабораторию направляют кровь сердца, печень, селезенку, головной мозг и трубчатую кость. При пневмониях дополнительно берут кусочки легкого на границе здоровой и пораженной тканей, средостенные лимфатические узлы, при артритах - сино­виальную жидкость. Трупы мелких животных доставляют целиком. В случае маститов направляют секрет пораженной доли вымени, эндометритов — со­держимое влагалища, взятое при помощи стерильных тампонов.

    Учитывая малую устойчивость возбудителя материал должен быть дос­тавлен не позднее 6 часов после гибели или убоя животного при условии транспортировки его в термосе со льдом (4-6°С). При более высокой тем­пературе срок доставки материала не должен превышать 2-3 часа.

    Микроскопическое исследование исходного материала. Готовят мазки, окрашивают по Граму, при подозрении на наличие капсулообразующих стрептококков препараты окрашивают на капсулы по Ро­мановскому-Гимза, Ольту и др. Мазки из молока можно окрашивать по Граму, используя методы, нивелирующие присутствие жира и белка.

    Клетки S. рneumoniае в окрашенных препаратах овальные или сфери­ческие, размером 0,5-1,25 мкм, обычно парные, причем соприкасающиеся стороны клеток уплощены, а наружные вытянуты и заострены (ланцето­видный диплококк). Также клетки могут располагаться одиночно, корот­кими цепочками, окружены капсулой.

    Клетки S. equi сферической или овальной формы, размером
    0,6-1,0 мкм, располагаются одиночно, парами, короткими цепочками, в мазках из гноя в виде длинных цепочек, имеют капсулу.

    Клетки S. agalactiae (S. dysagalactiae) сферические, размером 0,6-
    1,2 мкм, чаще располагаются в виде коротких или средней длины цепочек.

    Клетки S. руoqenes сферические, размером 0,5-1,0 мкм, в виде корот­ких или длинных цепочек (в бульоне длинные цепочки). Энтерококки име­ют овальную форму, размер 0,6-2,0х0,6-2,5 мкм, располагаются пара­ми или короткими цепочками.

    Результаты микроскопического исследования, с учетом полиморфизма бактерий на фоне лекарственной терапии, имеют ориентировочное диагно­стическое значение.

    Культивирование. Стрептококки - факультативные анаэробы. Исследуемый материал вы­севают на кровяной, глюкозо-кровяной агар (кровь барана или крупного рогатого скота), глюкозо-сывороточный МПБ (рН 7,4-7,8). Контаминированный материал засевают на селективные среды: агар с антибиотика­ми, азидом натрия; образцы молока целесообразно высевать на среду Эд­варда для выявления гемолиза и гидролиза эскулина.

    Для обнаружения энтерококков используют специальные селективные среды: молочно-полимиксиновая среда Калины, желчно-кровяной агар Беленького и др. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-
    48 ча­сов.

    Характер роста стрептококков на питательных средах. На глюкозо-кровяном агаре стрептококки в основном растут в виде мел­ких, прозрачных или слегка мутноватых колоний с ровными краями, как правило окруженных зоной гемолиза. Различают α- и β-гемолитические стрептококки.

    Гемолиз типа α-: неполный гемолиз, часто с зеленоватым оттенком за счет перехода гемоглобина в метгемоглобин, далее обычно находится уз­кая зона β -гемолиза.

    β -гемолиз - полный гемолиз эритроцитов. Отсутствие разруше­ния эритроцитов и гемоглобина обозначают как γ-гемолиз. Гемоли­тическая активность различных видов стрептококков представлена в табл. 7.

    Стрептококковый агар

    Mitis Salivarius Agar
    Стрептококковый агар

    M259

     

    Эту среду рекомендуют для выделения из смешанных культур стрептококков, особенно Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Enterococcus faecalis, которые дают на кровяном агаре альфа-гемолиз или относятся к негемолитическим.
     

     

    Рост Streptococcus mitis на стрептококковом агаре (M259)

     

     

    Состав**:

    Ингредиенты

    грамм/литр

    Гидролизат казеина

    15,00

    Пептический перевар животной ткани

    5,00

    Глюкоза

    1,00

    Сахароза

    50,00

    Калия гидрофосфат

    4,00

    Трипановый синий

    0,075

    Кристаллический фиолетовый

    0,0008

    Агар-агар

    15,00

    Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

     

    ** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

    Приготовление:

    Размешать 90,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в соответствующие емкости. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50-55°С и асептично добавить 1 мл 1%-ного раствора теллурита калия (FD052). После добавления теллурита калия НЕ НАГРЕВАТЬ СРЕДУ.

    Принцип и оценка результата:

    Эта среда готовится по прописи Чепмен (1) для выделения из смешанных культур стрептококков, которые дают альфа-гемолиз или относятся к негемолитическим. На этой высокоселективной среде (при добавлении 1% теллурита калия) можно выделять стрептококки из обильно контаминированного материала, например, различных экссудатов, фекалий и пр. На ней подавляется рост широкого круга бактерий. Некоторые авторы для подавления роста таких грамотрицательных бактерий, как протеи, рекомендуют использовать азид натрия (2).

    Гидролизат казеина и пептический перевар животной ткани служат источником азотистых питательных веществ (аминокислот, пептидов), витамина В1, микроэлементов и других веществ, необходимых для роста микроорганизмов. Глюкоза и сахароза являются источником ферментируемых углеводов. Фосфат обеспечивает буферные свойства среды. Трипановый синий является кислым синим диазокрасителем, кристаллический фиолетовый – щелочным красителем и бактериостатическим средством, которое подавляет рост многих грамположительных микроорганизмов.

    Контроль качества:

    Внешний вид порошка:

    Гомогенный сыпучий порошок светло-голубого цвета.

    Плотность готовой среды:

    Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

    Цвет и прозрачность готовой среды:

    Среда имеет темно-синюю окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

    Кислотность среды:

    При 25°С водный раствор (9,0 вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

    Культуральные свойства:

    Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35-37°С.

    Штаммы микроорганизмов (АТСС)

    Рост

    Цвет колоний

    Streptococcus pyogenes (19615)

    Хороший
    или обильный

    Синий

    Streptococcus mitis (9895)

    Хороший
    или обильный

    Синий

    Streptococcus salivarius

    Хороший
    или обильный

    Голубой

    Escherichia coli (25922)

    Подавляется

    Staphylococcus aureus (25923)

    Подавляется

    Ссылки:

    1. Chapman, 1946, Am. J. Digestive Diseases, 13 : 105.
    2. Snyder and Lichstein, 1940, J. Infect. Dis., 67 : 113.
    3. Lichstein and Snyder, 1941, J. Bact., 42 : 653.

    Условия и сроки хранения:

    Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

     

    Streptococcus spp / Enterococcus spp

    Azide Blood Agar Base
    Основа кровяного агара с азидом натрия

    для селективного выделения стрептококков и стафилококков из смешанных бактериальных культур и их выращивания

    Azide Dextrose Broth
    Сахарный бульон с азидом натрия

    селективная среда для обнаружения и подсчета энтерококков в сточных водах, воде, пищевых продуктах и других объектах, предположительно имеющих фекальное загрязнение

    B.A.G.G. Broth Base (Buffered Azide Glucose Glycerol Broth Base)
    Основа забуференного бульона с азидом, глюкозой и глицерином

    для обнаружения энтерококков в клиническом материале и объектах санитарно-микробиологического контроля

    Bile Esculin Agar Base
    Основа желчно-эскулинового агара

    для выделения и предварительной идентификации энтерококков в пищевых продуктах и фармпрепаратах
    FD050 *Esculin Эскулин

    Bile Esculin Azide Agar
    Желчно-эскулиновый агар с азидом натрия

    в качестве селективной используется для выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков (энтерококков)

    Blood Agar Base (Infusion Agar)
    Основа кровяного агара

    для выделения и культивирования (после добавления крови) многих притязательных микроорганизмов, в том числе таких возбудителей инфекций, как стрептококки и нейссерии

    Blood Agar Base No. 2
    Основа кровяного агара N 2

    для выделения (после добавления крови) с максимальной эффективностью стрептококков, пневмококков и других прихотливых микроорганизмов без влияния на их гемолитические реакции

    Brain Heart Infusion Agar
    Сердечно-мозговой агар

    для культивирования прихотливых патогенных бактерий, плесневых и дрожжевых грибов.

    Brain Heart Infusion Broth
    Сердечно-мозговой бульон

    является высокопитательной средой, которую применяют для стимуляции роста притязательных кокков и других микроорганизмов при выделении гемокультур и в патогенетических исследованиях.

    China Blue Lactose Agar
    Лактозный агар с китайским синим

    Эта среда является стандартной неингибирующей средой для дифференциации и подсчета бактерий в молоке.

    Columbia Blood Agar Base
    Основа колумбийского кровяного агара

    используется в качестве эффективной основы для приготовления кровяного, шоколадного агаров, а также различных селективных и дифференциальных сред
    FD030 *Staph-Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стафилококков и стрептококков
    FD031 *Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стрептококков

    Columbia Broth Base
    Основа колумбийского бульона

    Эта среда является средой общего назначения и используется также для культивирования прихотливых микроорганизмов из клинического материала
    FD031 *Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стрептококков

    *Columbia C.N.A. Agar
    Колумбийский агар для выделения грамположительных кокков

    для селективного выделения “патогенных” грамположительных кокков из клинического и другого материала

    Edward’s Medium, Modified
    Среда Эдвардса для стрептококков модифицированная

    в качестве селективной дифференциальной среды используют для быстрого выделения стрептококков, вызывающих мастит у крупного рогатого скота

    Enterococcus Confirmatory Agar
    Агар для обнаружения энтерококков

    для подтверждения присутствия энтерококков в воде и других материалах

    Enterococcus Confirmatory Broth
    Бульон для обнаружения энтерококков

    для подтверждения присутствия энтерококков в воде и других материалах

    Enterococcus Presumptive Broth
    Бульон для индикации энтерококков

    для подтверждения присутствия энтерококков в воде и других материалах, имеющих санитарное значение

    Esculin Azide Broth
    Эскулиновый бульон с азидом натрия

    для селективного культивирования и идентификации энтерококков и некоторых стрептококков

    Ethyl Violet Azide Broth (E.V.A.)
    Азидный бульон с этилвиолетом (EVA)

    для определения и подтверждения присутствия энтерококков, как индикаторов фекального загрязнения воды и других материалов

    M922

    GTC Agar Base
    Основа агара GTC

    Для выделения энтерококков из пищевых продуктов в течение 18 ч
    FD044 *GTC Supplement Добавка GTC

    Hartley`s Digest Broth
    Бульон Хартли с переваром сердца

    Среду рекомендуют в качестве среды общего назначения для культивирования широкого круга микроорганизмов из крови, особенно, стрептококков, а также возбудителя дифтерии.

    KF Streptococcal Agar Base
    Основа агара KF для энтерококков

    Эту среду в качестве селективной рекомендуют использовать для подсчета энтерококков в воде поверхностных источников методом мембранных фильтров или при непосредственном посеве на среду в чашке.
    FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)
    FD093 *Brom Cresol Purple Бромкрезоловый пурпурный

    KF Streptococcal Broth Base
    Основа бульона KF для энтерококков

    для определения и подсчета энтерококков в пробах воды различных категорий, а также для исследования фекалий и других материалов
    FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)

    Kanamycin Esculin Azide Agar
    Эскулиновый агар с азидом и канамицином

    для выделения энтерококков из пищевых материалов

    Kanamycine Esculine Azide Broth
    Эскулиновый бульон с азидом и канамицином (для энтерококков)

    для селективного выделения и идентификации энтерококков из пищевых материалов

    L.S. Differential Medium Base (Lactobacillus Streptococcus Dif-ferential Medium Base)
    Дифференциальная среда L.S. (для молочнокислых бактерий)

    для получения обильного роста и дифференциации лактобактерий и стрептококков по культуральным свойствам, восстановлению ТТХ и казеиновой реакции
    FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)

    Mitis Salivarius Agar
    Стрептококковый агар

    для выделения из смешанных культур стрептококков, особенно Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Enterococcus faecalis, которые дают на кровяном агаре альфа-гемолиз или относятся к негемолитическим
    FD052 Теллурит калия 1% раствор (5 флакончиков по 10 мл)

    Pike Streptococcal Broth
    Стрептококковый бульон (по Пайку)

    для селективного обогащения и культивирования стрептококков с горловых тампонов

    SF Broth
    Энтерококковый бульон SF

    в качестве селективной среды используют в диагностических исследованиях для определения энтерококков и их дифференциации от других кокков

    Streptococcus Enrichment Broth (SE Broth)
    Обогатительный бульон для стрептококков

    Streptococcus Lactis Differential Agar Base
    Основа дифференциального агара для молочнокислых стрептококков

    для дифференциации утилизирующих и не утилизирующих цитрат вариантов Lactococcus lactis и Lactococcus lactis подвида cremoris

    Streptococcus Selection Agar
    Селективный агар для стрептококков

    для селективного выделения и подсчета всех вариантов стрептококков, включая b -гемолитические группы А

    Streptococcus Selection Broth
    Селективный бульон для стрептококков

    для селективного выделения и подсчета всех вариантов стрептококков, включая b -гемолитические группы А

    Todd Hewitt Broth
    Бульон для стрептококков (по Тодду-Хьюиту)

    для культивирования стрептококков группы А, используемых в серологических реакциях

    питательная среда для выделения стрептококков - патент РФ 2323969

    Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для диагностики стрептококков. Питательная среда содержит панкреатический гидролизат казеина, пептон ферментативный, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, экстракт хлебных дрожжей, лактозу, бромкрезоловый пурпуровый, глюкозу, L-цистин, сульфит натрия, цитрат натрия, азид натрия, кристаллический фиолетовый, агар микробиологический, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды, придать питательной среде дифференцирующие свойства, снизить стоимость препарата. 1 табл.

    Формула изобретения

    Питательная среда для селективного выделения стрептококков, содержащая питательную основу, глюкозу, L-цистин, сульфит натрия, цитрат натрия, азид натрия, кристаллический фиолетовый, агар микробиологический, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что дополнительно в качестве источника азотистого питания она содержит пептон ферментативный, в качестве стимуляторов роста - стимулятор роста гемофильных микроорганизмов и экстракт хлебных дрожжей, а в качестве индикаторной системы - лактозу и бромкрезоловый пурпуровый при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

    панкреатический гидролизат казеина 29,0-31,0
    пептон ферментативный 19,0-21,0
    глюкоза 2,4-2,6
    лактоза 9,0-10,1
    экстракт хлебных дрожжей 4,9-5,2
    стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 9,0-10,1
    цитрат натрия 0,9-1,1
    L-цистин 0,19-0,21
    сульфит натрия 0,91-0,21
    азид натрия 0,19-0,21
    кристаллический фиолетовый 0,0019-0,0022
    бромкрезоловый пурпуровый 0,15-0,17
    агар микробиологический 11,0-12,5

    Описание изобретения к патенту

    Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для диагностики стрептококковых инфекций.

    Постановка достоверного этиологического диагноза стрептококковых глоточных и кожных инфекций во всех случаях, кроме скарлатины, требует проведения микробиологических исследований, предусматривающих выделение и видовую идентификацию стрептококков.

    До настоящего времени, в отечественной клинической практике отсутствуют коммерческие питательные среды для выделения стрептококков. Единственная коммерческая среда - среда для выделения гемокультур и культивирования стрептококков («Аллерген», г.Ставрополь) сейчас не выпускается. В клинической практике страны для выделения стрептококков используются среды лабораторного приготовления: питательный агар или триптиказо-соевый агар с добавлением 3-5% дефибринированной крови [3], питательный бульон с добавлением сыворотки крупного рогатого скота (10%) или глюкозы (0,2%) [10], мясопептонный агар с 5-7% дефибринированной крови кролика или барана [7]. Для подавления роста посторонней микрофлоры в процессе приготовления среды в лабораторных условиях добавляют антибиотики [4, 5]. Как правило, качество и стандартность таких сред, с добавлением биологических жидкостей, не всегда отвечают предъявляемым требованиям.

    За рубежом разработаны питательные среды для выделения стрептококков, в которых в качестве селективного агента используется азид натрия [8, 13, 14]. Но не каждая практическая лаборатория в состоянии купить их в силу высоких цен, отсутствие же коммерческого выпуска ограничивает их применение для расшифровки стрептококкозов.

    По своей направленности и совокупности признаков наиболее близкой к заявляемому изобретению является Streptosel agar, содержащий в качестве источников азотистого питания панкреатический гидролизат казеина, папаиновый гидролизат соевой муки, источника углеводного питания - глюкозу, в качестве ингибиторов грамположительной и грамотрицательной микрофлоры - азид натрия, цитрат натрия, сульфит натрия, кристаллический фиолетовый, а также L-цистин, хлорид натрия, агар [13]. Недостатками данной среды, принятой за прототип, являются следующие: Streptosel agar является зарубежной средой, дорог и недоступен для многих лабораторий страны; во-вторых, Методическими рекомендациями по микробиологической диагностике стрептококковых инфекций выделена (п.7) необходимость дифференциации гемолитических и зеленящих стрептококков с энтерококками [10]. Причиной, препятствующей достижению вышеуказанного технического результата при использовании этой среды, принятой нами за прототип, является то, что она не обладает дифференцирующими свойствами и предполагает дальнейшую идентификацию выделенных культур стрептококков по дополнительным тестам. Последнее удлиняет сроки постановки диагноза.

    Задача предлагаемого изобретения - повышение ростовых и придание дифференцирующих свойств среде.

    Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве стимуляторов роста стрептококков она дополнительно содержит пептон ферментативный, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, экстракт хлебных дрожжей [9, 11, 12]. Для придания дифференцирующих свойств в состав препарата дополнительно введена индикаторная система, состоящая из лактозы и красителя бромкрезолового пурпурового. Среда содержит также панкреатический гидролизат казеина (триптон) [9], глюкозу, цитрат натрия, сульфит натрия, L-цистин, азид натрия, кристаллический фиолетовый, агар при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

    панкреатический гидролизат казеина 29,0-31,0
    пептон ферментативный 19,0-21,0
    глюкоза 2,4-2,6
    лактоза 9,0-10,1
    экстракт хлебных дрожжей 4,9-5,2
    стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 9,0-10,1
    цитрат натрия 0,9-1,1
    L-цистин 0,19-0,21
    сульфит натрия 0,19-0,21
    азид натрия 0,19-0,21
    кристаллический фиолетовый 0,0019-0,0022
    бромкрезоловый пурпуровый 0,15-0,17
    агар микробиологический 11,0-12,5

    Предлагаемая пропись отличается от прописи прототипа по следующим принципам.

    1. Введена индикаторная система, включающая лактозу и индикатор бромкрезоловый пурпуровый. Методические рекомендации предлагают расширенную схему дифференциации гемолитических и зеленящих стрептококков с энтерококками, занимающую 3 и более дней и необходимость наличия нескольких питательных сред и тест-систем для последующей видовой идентификации стрептококков. Предлагаемая среда для выделения стрептококков (Стрептококк-азид-агар) благодаря введенному в состав углеводу и красителю обеспечивает четкие дифференцирующие свойства и в результате этого позволяет идентифицировать по крайней мере 3 вида стрептококков. На малинового цвета агаровой пластинке сконструированной среды наблюдается уже через 18-36 часов инкубации рост серых блестящих полупрозрачных колоний пиогенного стрептококка. Колонии зеленящего стрептококка - голубые, с влажным блеском; колонии фекального стрептококка - крупные, плотные, серо-желтого цвета. Таким образом среда для выделения стрептококков сокращает сроки выделения чистой культуры и определение ее видовой принадлежности, что ускоряет постановку диагноза.

    2. В составе препарата сбалансированная питательная базовая основа среды, состоящая из комбинации панкреатического гидролизата казеина, пептона ферментативного и обогащенная стимуляторами роста (стимулятор роста гемофильных микроорганизмов и экстракт хлебных дрожжей).

    В отличие от "классических" питательных сред для выделения стрептококков, требующих введения крови или сыворотки [1], питательная базовая основа способствует оптимальному росту стрептококков, увеличивая размеры колоний, улучшая морфологию и, следовательно, дифференцирующие свойства, без добавления биологических жидкостей. Все составные части рецептуры - гостированные ингредиенты отечественного производства.

    Среду получают следующим образом.

    Пример 1. В 1 л дистиллированной воды вносят 29,0 г панкреатического гидролизата казеина, 19,0 г пептона ферментативного, 2,4 г глюкозы, 9,0 г лактозы, 4,9 г экстракта хлебных дрожжей, 9,0 г стимулятора роста гемофильных микроорганизмов, 0,9 г цитрата натрия, 0,19 г L-цистина, 0,19 г сульфита натрия, 0,19 г азида натрия, 0,0019 г кристаллического фиолетового, 11,0 г агара микробиологического, 0,15 г бромкрезолового пурпурового. Тщательно перемешивают, полученную суспензию доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара. рН среды 7,4±0,2. Среду охлаждают до температуры 45-50°С и разливают в стерильные чашки Петри слоем 4,0-5,0 мм, оставляют до застывания. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате в течение 40-60 минут при температуре 37°С. Отбор клинических проб, подготовку их к исследованию и посеву на среду проводят в соответствии с рекомендациями, изложенными в "Микробиологической диагностике стрептококковых инфекций" (М., 1996). Инкубацию проводят в "свечном" сосуде в атмосфере, содержащей углекислый газ. Результат учитывают через 24-48 часов инкубации.

    Пример 2. В 1 л дистиллированной воды вносят 30,0 г панкреатического гидролизата казеина, 20,0 г пептона ферментативного, 2,5 г глюкозы, 10,0 г лактозы, 5,0 г экстракта хлебных дрожжей, 10,0 г стимулятора роста гемофильных микроорганизмов, 0,2 г L-цистина, 1,0 г цитрата натрия, 0,2 г сульфита натрия, 0,2 г азида натрия, 0,002 г кристаллического фиолетового, 0,16 г бромкрезолового пурпурового, 11,75 г агара микробиологического. Далее согласно примеру 1.

    Пример 3. В 1 л дистиллированной воды вносят 31,0 г панкреатического гидролизата казеина, 21,0 г пептона ферментативного, 2,6 г глюкозы, 10,1 г лактозы, 5,2 г экстракта хлебных дрожжей, 10,1 стимулятора роста гемофильных микроорганизмов, 0,21 г L-цистина, 1,1 г цитрата натрия, 0,21 г сульфита натрия, 0,21 г азида натрия, 0,0022 г кристаллического фиолетового, 0,17 г бромкрезолового пурпурового, 12,5 г агара микробиологического. Далее согласно примеру 1.

    Биологические показатели среды для выделения стрептококков (Стрептококк-азид-агар) и прототипа представлены в таблице.

    Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с прототипной средой. На предлагаемой среде колонии стрептококков более крупные, что немаловажно для визуальной видовой индикации колоний стрептококков, имеющих на нашей среде разную окраску. На прототипной среде колонии стрептококков мельче, белые, дифференциация отсутствует.

    Таблица
    КультурыПредлагаемая среда (Стрептококк-азид-агар) Среда-прототип (Streptosel-agar)
    морфология колоний дифференциацияморфология колоний дифференциация
    S.pyogenes блестящие, полупрозрачные, диаметр - 2,5-3 мм колонии серого цветаполупрозрачные, блестящие, диаметр - 1-1,5 ммколонии белого цвета
    S.viridansслизистые, непрозрачные, диаметр- 2-2,5 ммколонии голубого цветаполупрозрачные, диаметр - 1,5-2 мм колонии белого цвета
    S.faecalisкрупные, плотные, диаметр - 3-5 ммколонии серо-желтого цвета плотные, диаметр - 2,5 ммколонии белого цвета

    БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

    1. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1982, с.255-256.

    2. Брико Н.И. Болезни, вызываемые стрептококками группы А в начале 21 века: проблемы и перспективы профилактики. Вестник АМН, 2001, №2.

    3. Брико Н.И., Ещина А.С., Ряпис Л.А. Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций. Пособие для врачей и научных работников. М.: Хризосом, 2000, с.26.

    4. Зациорская С.Л. Оценка различных питательных сред при выделении стрептококков группы В из клинических материалов. Лабораторное дело, 1989, №3, с.15-17.

    5. Игонина Ю.А., Шевчук М.С., Бочков И.А., Османов С.К. Подбор питательных сред для лабораторной диагностики стрептококков группы В. Журн. микробиол., эпидемиол. и инфекц. бол., 1983, №9, с.21-24.

    6. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1980.

    7. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. Под ред. Матвеева К.И. и Соколова М.И., М., 1964, с.452.

    8. Руководство по применению продукции фирмы Himedia в лабораторной практике. 2003, с.75.

    9. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. Под ред. Жукова-Вережникова Н.Н., т.1, М., 1962, с.347-348, 354-355.

    10. Стрептококковые инфекции. II. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Методические рекомендации. Издательство «Грантъ», 1999, с.15.

    11. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. М., 2000, с.246-247.

    12. Физико-химические методы контроля ингредиентов питательных сред и биопрепаратов. Под ред. Колесова С.Г. М., 1970, с.63-65.

    13. Manual of BBL. Products and laboratory procedures. Sixth Edition. Cat. №5200, 1988, p.254.

    14. Microbiology Manual Merck. Darmstadt, 1990, p.192.

    Выявление возбудителей кокковых инфекций - Мясо и специи. Блог технолога.

    Обнаружение в мясе возбудителей коккозов (стрептококков, пневмококков, стафилококков) проводится в 3 этапа:
    микроскопия мазков-отпечатков; выделение культур из материала, их идентификация и дифференциация; изучение патогенных свойств выделенных культур.
    Морфологические и культуральные свойства. При микроскопии мазков-отпечатков, окрашенных по Граму, а при подозрении на наличие в мясопродуктах пневмококков — на капсулу по Ольту обнаружение большого количества грамположительных кокков, круглых или ланцетовидных, расположенных одиночно, по два, цепочками и скоплениями, позволяет предполагать стрептококковую инфекцию. Однако микроскопическое исследование имеет ориентировочное значение.

    Посевы из патологического материала делают в мясо-пептонный бульон с 1 % глюкозы и 10 % инактивированной нормальной сыворотки крови лошади и на мясо-пептонный агар с 1 % глюкозы и 5 —10 % дефибринированной крови барана или кролика. Посевы инкубируют в термостате при 37—38 °С в течение 18—24 ч.
    На глюкозокровяном агаре стрептококки растут в виде мелких росинчатых или слегка мутноватых колоний с ровными краями, окруженных, как правило, зоной гемолиза; стафилококки образуют круглые выпуклые блестящие колонии, различного (белого, лимонно-желтого, золотистого) цвета; пигмент хорошо выражен на МПА.
    По характеру гемолиза стрептококки делят на три группы:
    альфа-гемолитические стрептококки — вызывают неполный гемолиз эритроцитов, сопровождающийся образованием вокруг колоний зоны зеленоватого цвета;
    бетта-гемолитические стрептококки — вызывают полный гемолиз эритроцитов , характеризующийся образованием вокруг колоний зоны просветления;
    гамма-стрептококки — не вызывают гемолиза эритроцитов.
    Патогенные стафилококки на кровяном агаре вызывают альфа-гемолиз.
    В мазках из культур с плотной питательной среды стрептококки располагаются парами, короткими цепочками, иногда образуют скопления, стафилококки — гроздьями.
    На жидкой питательной среде для стрептококков характерен придонный рост, при встряхивании разбивающейся на крупинки (хлопья) ; энтерококки и пневмококки дают диффузное помутнение. Стафилококки образуют слизистый осадок, который при встряхивании поднимается в виде косички, пленку, пристеночное кольцо.
    В мазках из бульонных культур стрептококки располагаются в основном цепочками различной длины.
    Дифференциация стрептококков. Дифференциацию культур стрептококков проводят по их чувствительности к желчи, способности расти в питательных средах с повышенным содержанием хлорида натрия и редуцировать метиленовый синий, а также по терморезистентности и ферментативным свойствам.
    Лизис желчью. В две пробирки с глюкозосывороточным бульоном, в одну из которых добавлено 10 % желчи крупного рогатого скота, вносят по 0,5—0,7 см3 суточной бульонной культуры и выдерживают при 37 — 38 °С в течение 1 ч. При лизисе культуры содержимое подопытной пробирки просветляется.
    Рост на среде с 40% желчи. Чистую культуру стрептококков засевают на глюкозосывороточный бульон, содержащий 40% желчи крупного рогатого скота, и инкубируют при 37—38 °С в течение 18 - 24 ч, после чего учитывают наличие или отсутствие роста.
    Рост на среде с 6,5% хлорида натрия. Чистую культуру стрептококков засевают на глюкозосывороточный бульон, содержащий 6,5 % хлорида натрия. Учет результатов проводят через 18 — 24 ч инкубирования при 37—38 °С по наличию или отсутствию роста.
    Редукция метиленового синего. Чистую культуру стрептококков засевают в пробирки с обезжиренным молоком, содержащим 0,1 % метиленового синего (среда имеет насыщенно-голубой цвет). Результаты учитывают через 18—24 ч инкубирования при 37 — 38°С. При редукций метиленового синего среда обесцвечивается и приобретает розовато-желтый цвет.
    Терморезистентность. Пробирки с исследуемой суточной культурой, выращенной в глюкозо-сывороточном бульоне, прогревают в водяной бане при 58—60°С 30 мин, затем делают высевы на глюкозо-кровяной агар, которые выдерживают в термостате при 37 —38°С в течение 18—24 ч. Наличие роста культуры свидетельствует о ее терморезистентности.
    Ферментативные свойства. Для определения ферментативных свойств выделенных культур стрептококков используют среды Гисса с раффинозой, сорбитом и маннитом. Посевы инкубируют при 37—38 °С в течение 5 сут, после чего проводят учет результатов.
    Дифференциация энтерококков и пневмококков от стрептококков других серологических групп представлена в табл. 6.

    Таб.6  Культурально-биохимические свойства стрептококков
    Наименование возбудителя Гемолиз Лизис желчью 1-% Рост на среде с 40% желчи Рост на среде с 6,5% хлорида натрия Редукция метиленового синего Термо- резистентность к 60°С 30 мин Ферментация
    Раффинозы Сорбита Маннита
    Энтерококки (серогруппа Д) альфа - + + + + - + +
    Пневмококки альфа + - - - - + - -
    Стрептококки других серогрупп бетта, гамма - - - - - - - -

    Обозначения: "+" - тест положительный; "-" - тест отрицательный.
    При необходимости дифференцировать стрептококки от стафилококков используют каталазную пробу и способность стафилококков расти на средах, содержащих 10 % хлорида натрия (стрептококки при указанной концентрации хлорида натрия не растут).
    Для постановки каталазной пробы на предметное стекло наносят каплю свеже-приготовленного 3 %-ного раствора Н202 и растирают в ней одну или несколько колоний; стафилококки в отличие от стрептококков образуют каталазу и вызывают пенообразование.
    Постановка биологической пробы. Определение патогенных свойств стрептококков проводят на белых мышах массой 14 —16 г. Для заражения используют только свежевыделенные суточные культуры стрептококков с глюкозосывороточного бульона.
    Заражают 3 белых мышей внутрибрюшинно дозой 0,5 см3. Наблюдение за подопытными животными ведут в течение 5 сут. При заражении патогенной культурой белые мыши гибнут, как правило, через 1 -2 сут.
    Культуру признают патогенной при гибели не менее 2 белых мышей. Из спинного мозга, крови сердца, печени и селезенки каждой павшей мыши делают посевы на глюкозокровяной агар и глюкозосывороточный бульон для выделения исходной культуры. Срок исследования — до 7 дней.
    Патогенность стафилококков определяют реакцией коагулирования плазмы крови. С этой целью ее разливают по 0,5 см3 в две стерильные пробирки, в одну из которых вносят петлей суточную агаровую культуру, другая остается контрольной;
    обе пробирки помещают в термостат при температуре 37 °С. Результаты реакции коагуляции учитывают в течение 2-4 ч и через 24 ч. Штаммы стафилококка, продуцирующие фермент плазмокоагулазу, вызывают свертывание плазмы, вследствие чего она превращается в студнеобразную массу, не выливающуюся при перевертывании пробирки. Свертывание плазмы обозначается знаком "+" суказанием времени, в течение которого произошла реакция. При получении положительной реакции плазмокоагуляции считается, что в мясе обнаружен патогенный стафилококк.
    Ветеринарно-санитарная оценка. При выделении кокковой микрофлоры из лимфатических узлов, глубоких слоев мускулатуры и внутренних органов туши при отсутствии патологических изменений в мышечной ткани обезвреживают действием высокой температуры (проваркой), а внутренние органы направляют в утилизацию.
    При обнаружении кокковой микрофлоры в мышечной ткани и лимфатических узлов, при наличии дегенеративных изменений в мышцах или несвойственном им запахе, не исчезающем в пробе варкой, туши и продукты убоя утилизируют.
    Мясо, полученное от убоя коров и овец, больных маститом, эндометритом, параметритом, подлежит кроме исследования на патогенные стафилококки проверке на сальмонеллы. При отсутствии сальмонелл и патогенных стафилококков, а также дегенеративных изменений в мускулатуре тушу и внутренние органы выпускают без ограничения. При наличии сальмонелл мясо подлежит проварке или переработке на колбасы и консервы, при выявлении стафилококков мясо направляют в проварку; пораженное вымя в том и другом случаях — на утилизацию.
    При стафилококкозе птицы в случае поражения одного из суставов удаляют патологически измененную часть, а тушку выпускают после проварки. Если заболевание распространено (процессы в суставах, изменения в органах), тушку с органами утилизируют. При стрептококкозе тушку и внутренние органы утилизируют.

    Лаборатория 14: Выделение и идентификация стрептококков

    В лаборатории мы рассмотрим два рода бактерий, которые могут проявляться в виде стрептококков: род Streptococcus и род Enterococcu s . Оба являются грамположительных кокков 0,5-1,0 мкм в диаметре, обычно встречающихся парами и цепочками различной длины при выращивании в жидкой среде и часто , встречающихся поодиночке, парами, короткими цепочками и кластерами при получении из агаризованной культуры .Как выяснилось в Лаборатории 8, они оба являются каталазо-отрицательными .

    A. Виды рода Streptococcus

    Streptococcus обычно классифицируются клинически на основании их гемолитических свойств на кровяном агаре и в соответствии с их серологическими группами .

    Стрептококки обычно выделяют на Кровяном агаре. Кровяной агар - одна из наиболее часто используемых сред в клинических лабораториях. Он состоит из обогащенной агаровой основы (триптический соевый агар), к которому были добавлены 5% эритроцитов барана .Кровяной агар обычно используется для выделения не только стрептококков, но также стафилококков и многих других патогенов. Помимо обогащения для роста привередливых патогенов, кровяной агар можно использовать для определения гемолитических свойств.

    Гемолиз относится к лизису красных кровяных телец в агаре, окружающем бактериальные колонии, и является результатом бактериальных ферментов, называемых гемолизинами . Хотя гемолиз часто можно наблюдать невооруженным глазом, в идеале его следует исследовать под микроскопом с использованием малого увеличения, особенно в случаях сомнительного гемолиза.Реакции на кровяном агаре называются бета-, альфа-, гамма- или двухзонными:

    См. Рис. 11 для просмотра фотографии, показывающей альфа-, бета- и гамма-гемолиз на кровяном агаре.

    См. Рис. 12 на чашке с кровяным агаром культуры из горла, показывающей возможные Streptococcus pyogenes .

    Многие стрептококки также могут быть отнесены к системе Lancefield . В этом случае они делятся на 19 различных серологических групп на основе углеводных антигенов в их клеточной стенке.Эти антигенные группы обозначаются буквами от A до H, от K до M и от O до V. Серологические группы Lancefield A, B, C, D, F и G обычно инфицируют людей, однако не все патогенные стрептококки. могут быть идентифицированы типированием по Лэнсфилду (например, Streptococcus pneumoniae ). Серологическое типирование для идентификации микроорганизмов будет обсуждаться более подробно позже в Lab 17 . Одноцепочечные ДНК-зонды, комплементарные видоспецифическим последовательностям р-РНК стрептококков и энтерококков, теперь также используются для идентификации этих организмов.

    Бета-стрептококки

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Серологические группы Lancefield A, B, C, D, F и G - это стрептококки, которые могут проявлять бета-гемолиз на кровяном агаре. Однако некоторые стрептококки группы B являются негемолитическими, а стрептококки группы D (обсуждаемые ниже) обычно проявляют альфа-гемолиз или не являются гемолитическими.

    Streptococcus pyogenes , часто называемый группы A, бета-стрептококки или GAS , поскольку они принадлежат к серологической группе A по Лансфилду и показывают бета-гемолиз на кровяном агаре, являются причиной большинства острых стрептококковых инфекций у человека. Изоляты S. pyogenes представляют собой грамположительных кокков диаметром 0,5–1,0 мкм, которые обычно образуют короткие цепочки в клинических образцах и более длинные цепочки в лабораторных средах. Наиболее частая инфекция - фарингит (стрептококковая ангина), поражение которого обычно ограничивается слизистыми оболочками и лимфатической тканью верхних дыхательных путей. S. pyogenes вызывает 15-30% случаев острого фарингита у детей и 5-10% случаев у взрослых.От 5% до 20% детей являются бессимптомными носителями. Фарингит передается от человека к человеку в первую очередь воздушно-капельным путем; кожные инфекции передаются при прямом контакте с инфицированным человеком или через фомиты.

    Однако из глотки стрептококки иногда распространяются в другие области дыхательных путей , вызывая ларингит, бронхит, пневмонию и средний отит (инфекция уха) . Иногда он может попадать в лимфатических сосудов или в кровь и распространяться в другие части тела, вызывая сепсис , остеомиелит, эндокардит, септический артрит и менингит.Он также может заразить кожу , вызывая рожистого воспаления , импетиго или целлюлита .

    Инфекции бета-стрептококком группы A могут вызывать два аутоиммунных заболевания , ревматическую лихорадку и острый гломерулонефрит , когда антитела, вырабатываемые против стрептококковых антигенов, перекрестно реагируют с мембранами суставов и тканью сердечного клапана в случае ревматической лихорадки или клубочковыми клетками и базальными мембранами почек при остром гломерулонефрите.

    Стрептококковый пирогенный экзотоксин (Spe) , продуцируемый редкими инвазивными штаммами и штаммами скарлатины Streptococcus pyogenes (бета-стрептококки группы А) . S. pyogenes продуцирует ряд SPE, которые являются цитотоксическими, пирогенными, усиливают летальные эффекты эндотоксинов и вносят вклад в вызванное цитокинами воспалительное повреждение. SPE вызывают синдром стрептококкового токсического шока (STSS) , в результате чего чрезмерное производство цитокинов приводит к лихорадке, сыпи и запуску каскада шока.SPE также, по-видимому, ответственны за индукцию некротического фасциита , - заболевания, которое может разрушать кожу, жир и ткани, покрывающие мышцу (фасцию). SPE B также является предшественником цистеиновой протеазы, которая может разрушать мышечную ткань.

    CDC сообщает, что примерно 9000-11 500 случаев инвазивного ГАЗ-заболевания происходит каждый год в США, причем на STSS и некротический фасциит приходится примерно 6-7% случаев. Уровень смертности от STSS составляет около 35%.Смертность от некротического фасциита составляет примерно 25%.

    Для получения дополнительной информации о факторах вирулентности для бета-стрептококков группы A см. Следующие учебные объекты в вашем руководстве по лекциям:

    Стрептококки группы B (GBS или Streptococcus agalactiae ) обычно показывают небольшую зону бета-гемолиза в крови. агар, хотя некоторые штаммы не являются гемолитическими. Изоляты S. agalactiae представляют собой грамположительных кокков диаметром 0,6–1,2 мкм, которые обычно образуют короткие цепочки в клинических образцах и более длинные цепочки в лабораторных средах.Их обнаруживаются в желудочно-кишечном тракте и мочеполовых путях у 15-45% здоровых женщин . Этот резервуар, наряду с нозокомиальной передачей, обеспечивает посевной материал, которым многие младенцы колонизируются при рождении. Считается, что частота передачи от матери, колонизированной GBS, своему ребенку составляет около 50%. Большинство колонизированных младенцев (и взрослых) остаются бессимптомными, однако примерно у у 1-2% колонизированных новорожденных разовьются инвазивные заболевания, связанные с СГБ, включая пневмонию, сепсис и / или менингит .Беременным женщинам следует пройти обследование, чтобы определить, являются ли они носителями СГБ, и назначить внутривенные антибиотики, если они являются носителями.

    Другие инфекции, связанные со стрептококками группы B, включают инфекции мочевыводящих путей, инфекции кожи и мягких тканей, остеомиелит, эндометрит и инфицированные язвы. (пролежни и язвы, связанные с диабетом) . У пациентов с ослабленным иммунитетом он иногда вызывает пневмонии и менингит.

    Стрептококки группы C (в основном S.equi, S. equisimilis и S. zooepidemicus ) являются бета-гемолитическими. Иногда они вызывают фарингит, а иногда и бактериемию, эндокардит, менингит, пневмонию, септический артрит и целлюлит. Стрептококки группы C - частая причина инфекций у животных.

    Стрептококки группы F (в основном S. anginosus ) были выделены из абсцессов головного мозга, рта и челюсти. Также они иногда вызывают эндокардит.

    Стрептококки группы G также обнаруживают бета-гемолиз.Иногда они вызывают фарингит, а также могут вызывать серьезные инфекции кожи и мягких тканей (в основном у пораженного хозяина), а также эндокардит, бактериемию и перитонит.

    Все эти бета-гемолитические стрептококки можно идентифицировать с помощью биохимического и / или серологического тестирования. Сегодня вы рассмотрите выделение и идентификацию бета-стрептококков группы А ( Streptococcus pyogenes ) с помощью биохимического тестирования. Серологическая идентификация будет проводиться в лаборатории 17.

    ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ
    БЕТА СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ А ( Streptococcus pyogenes )

    Бета-стрептококки группы А обычно выделяют на кровяном агаре . Streptococcus pyogenes продуцирует

    1. Очень маленьких колоний от белого до серого диаметром примерно 1 мм.

    2. Зона бета-гемолиза (см. Рис. 7) около 2-3 мм в диаметре, окружающая каждую колонию.

    Существуют два стрептококковых гемолизина, стрептолизин S и стрептолизин О.Стрептолизин О может быть инактивирован кислородом , поэтому более отчетливый гемолиз можно увидеть, если ударил агар несколько раз . Таким образом, некоторые организмы образуют подповерхностные колонии, растущие вдали от кислорода. Поскольку и стрептолизин S, и стрептолизин O активны в пораженной области, можно увидеть более четкую зону бета-гемолиза.

    3. Чувствительность к антибиотику бацитрацину, обнаруженному на диске Taxo A® .

    Только бета-стрептококки группы А чувствительны к бацитрацину, что показано зоной ингибирования вокруг диска Taxo A® (см.рис.7), бумажный диск с низким содержанием бацитрацина. Другие серологические группы стрептококков устойчивы к бацитрацину и не проявляют угнетения вокруг диска. (Группа Lancefield бета-стрептококка группы А также может быть определена прямым серологическим тестированием, как будет продемонстрировано в лаборатории 17.)

    См. Рис. 12 на чашке с кровяным агаром культуры из горла, показывающей возможные Streptococcus pyogenes .

    2. Пневмококк (Streptococcus pneumoniae)

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Streptococcus pneumoniae , или пневмококк, представляет собой ланцетообразный (заостренный, как копье) грамположительный кокк 0.Диаметр 6-1,2 мкм. Обычно они выглядят как диплококк , но иногда появляются одиночно или короткими цепочками. Пневмококки часто обнаруживаются как нормальная флора носоглотки здоровых носителей . Колонизация глотки происходит у 40-50% здоровых детей и 20-30% здоровых взрослых.

    Во всем мире, а также в США S. pneumoniae остается наиболее частой причиной внебольничной пневмонии, среднего отита, бактериемии и бактериального менингита.В США пневмококки являются наиболее частой причиной внебольничной пневмонии, требующей госпитализации , вызывая около 500000 случаев в год и обычно проявляясь как вторичная инфекция у ослабленного или ослабленного иммунитета. Пневмококки также вызывают от 6 до 7 миллионов случаев среднего отита в год, являются основной причиной синусита у людей всех возрастов, вызывают 55000 случаев бактериемии, и 3000 случаев менингита, Наиболее частая причина менингита у взрослых и детей старше 4 лет.

    Капсула служит основным фактором вирулентности, позволяя пневмококку противостоять фагоцитарному поглощению, а гликопептиды из его грамположительной клеточной стенки могут приводить к чрезмерному производству цитокинов и массивному воспалительному ответу.

    Пневмококки показывают альфа-гемолиз на кровяном агаре (см. Фиг. 5B).

    Для получения дополнительной информации о факторах вирулентности для Streptococcus pneumoniae см. Следующие учебные объекты в вашем руководстве по лекциям:

    ИЗОЛЯЦИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ PNEUMOCOCCI ( Streptococcus pneumoniae)

    1. Выделение на кровяном агаре

    Пневмококки часто требуют обогащенной среды и повышенного давления CO 2 для первоначального выделения. Обычно их выделяют на кровяном агаре и инкубируют в сосуде для свечей (закрытый контейнер, в который помещают зажженную свечу для удаления O 2 и увеличения CO 2 ) при 37 ° C. На кровяном агаре колонии выглядят маленькими, блестящими и полупрозрачными. Они окружены зоной альфа-гемолиза (см.рис.5Б). Из-за автолиза с возрастом в колониях может появиться депрессивный центр с приподнятым краем.

    2. Чувствительность к оптохину

    Пневмококки - единственные стрептококки, чувствительные к препарату оптохин (этилгидрокупреина гидрохлорид). Это можно обнаружить по зоне ингибирования вокруг диска Taxo P® (см. Фиг. 10), бумажного диска, содержащего лекарственное средство оптохин, который помещают на чашку с кровяным агаром перед инкубацией.

    3. Тест на растворимость в желчи

    Большинство колоний S. pneumoniae растворяются в течение нескольких минут при попадании на них капли желчи. (Этот тест сегодня не будет проводиться в лаборатории.)

    4. Окраска мокроты по Граму

    Streptococcus pneumoniae обычно проявляется в виде инкапсулированных грамположительных ланцетообразных диплококков .

    Viridans Streptococci

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Десять видов стрептококков известны как viridans streptococci .Это доминирующая нормальная флора верхних дыхательных путей . Виды включают S. mutans, S. sanguis, S. mitis и S. salivarius . S. mutans является основной причиной кариеса зубов . Стрептококки Viridans являются причиной от 50% до 70% случаев бактериального эндокардита , особенно у людей с ранее поврежденными сердечными клапанами. Они также часто связаны с бактериемией , инфекциями глубоких ран, абсцессами зубов и абсцессами внутренних органов .Стрептококки viridans демонстрируют альфа-гемолиз или не имеют гемолиза на кровяном агаре, не обладают антигенами группы Лансфилда и могут быть дифференцированы от других альфа-стрептококков с помощью биохимических исследований.

    B. Род Enterococcus

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Энтерококки грамположительные стрептококки, которые представляют собой нормальную флору кишечного тракта . Обычно они встречаются поодиночке, парами, короткими цепочками и кластерами , особенно при извлечении из агаровой культуры для окрашивания. Â Подобно роду Streptococcus , род Enterococcus является каталазо-отрицательным . Энтерококки ответственны за множество оппортунистических инфекций у человека и серологически относятся к стрептококкам группы D Лансфилда.

    Enterococcus faecalis - это наиболее распространенный энтерококк, вызывающий инфекции у человека, составляющий 80-90% клинических изолятов человеческих энтерококков. E. faecalis - это нормальная флора кишечного тракта у людей и регулярно выделяется из инфекций внутри брюшной полости (особенно после проникающей травмы), инфекций мочевыводящих путей , инфекций почек , инфекций простаты и инфекций поврежденной или поврежденной кожи , таких как диабетические или пролежневые язвы, ожоги и хирургические раны.Другие условно-патогенные виды энтерококков включают E. faecium и E. durans . Энтерококки стали второй по распространенности бактерией, выделяемой при внутрибольничных инфекциях мочевыводящих путей и ран, и третьей по частоте причиной нозокомиальной бактериемии . Фактически, ежегодно в США энтерококки вызывают около 110 000 инфекций мочевыводящих путей, 40 000 инфекций ран, 25 000 случаев внутрибольничной бактериемии и 1100 случаев эндокардита. Кроме того, энтерококки относятся к среди наиболее устойчивых к антибиотикам бактерий, а некоторые изоляты устойчивы ко всем известным антибиотикам.

    ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЭНТЕРОКОККОВ

    Энтерококки можно выделить и идентифицировать с использованием различных селективных и дифференциальных сред. Два таких носителя:

    1. SF бульон

    SF бульон содержит азид натрия, который подавляет большинство бактерий, кроме энтерококков. Энтерококки будут расти в бульоне SF и сбраживать декстрозу , превращая индикатор pH с фиолетового на желто-коричневый цвет (см. Рис.8).

    2. Желчный эскулиновый агар

    В отличие от большинства бактерий, энтерококки будут расти в присутствии солей желчных кислот в среде. Они гидролизуют эскулин , продуцируя эскулетин, который реагирует с солями железа в среде, превращая агар в черный (см. Рис. 9).

    На кровяном агаре большинство штаммов Enterococcus faecalis демонстрируют гамма-реакцию на агаре с овечьей кровью , однако некоторые штаммы проявляют бета-гемолиз.Колонии обычно имеют диаметр 1-2 миллиметра. Энтерококки также идентифицируются с помощью хемилюминесцентно меченых ДНК-зондов, комплементарных видоспецифичным последовательностям бактериальной рибосомной РНК (рРНК).

    СЦЕНАРИИ ДЛЯ СЕГОДНЯ ЛАБОРАТОРИИ

    Пример № 1

    Выберите либо unknown # 1, либо unknown # 2 в качестве неизвестного для Case Study # 1 .

    Мужчина 21 года жалуется на боль в горле и болезненное глотание.При физическом осмотре горла выявляется отек и эритема глотки, пятнистый экссудат, петехии на мягком небе и красный опухший язычок. У него температура 101,6 ° F. У него нет кашля или заметного насморка.

    Предположим, что ваше неизвестное - это транспортная среда из мазка из горла этого человека.

    ВНИМАНИЕ: ЛЕЧИТЬ КАЖДЫЙ НЕИЗВЕСТНЫЙ ПАТОГЕН !. Сообщите своему инструктору о любых утечках или несчастных случаях. Вымойте и продезинфицируйте руки перед тем, как покинуть лабораторию.

    1 чашка кровяного агара, 1 диск Taxo A ®, 1 стерильный тампон, петля для посева

    ПРОЦЕДУРА (выполняется группами по 3 человека)

    1. Используя стерильную петлю для посева, нанесите штрихов для выделения на чашку с кровяным агаром, чтобы получить одиночных изолированных колоний (см. Рис. 2, этап 1, рис. 2, этап 2 и рис. 2, шаг 3). Перед нанесением штрихов на планшет нарисуйте «X» на дне чашки с кровяным агаром, чтобы указать, где вы начинаете штриховой узор .

    3. Используя петлю для посева, проткните агар несколько раз в каждую из зон роста, чтобы обнаружить чувствительный к кислороду гемолизин (рис. 2, шаг 4).

    4. Поместите диск Taxo A®, содержащий бацитрацин, в центр области планшета, на котором вы впервые нарисовали штрих (область, на которой вы нарисовали «X») , где вы ожидаете увидеть наиболее сильный рост (рис. 2, шаг 5).

    5. Инкубируйте чашку с кровяным агаром в перевернутом виде и поместите в держатель для чашек Петри на полке инкубатора 37 ° C, соответствующего вашему лабораторному отделению , до следующего лабораторного периода.

    Пример # 2

    Выберите unknown # 3 в качестве вашего неизвестного для Case Study # 2 .

    Госпитализированная 57-летняя женщина с постоянным мочевым катетером и несколькими курсами лечения антибиотиками испытывает надлобковый дискомфорт, боль в пояснице и температуру 101,1 ° F. Общий анализ крови показывает лейкоцитоз со сдвигом влево. Индикаторная полоска мочи показывает положительный тест на лейкоцитарную эстеразу, отрицательный тест на нитриты, 30 мг белка на децилитр и эритроциты в моче.

    Предположим, что ваше неизвестное - это культура этого пациента.

    ВНИМАНИЕ: ЛЕЧИТЬ КАЖДЫЙ НЕИЗВЕСТНЫЙ ПАТОГЕН

    .

    Выделение и идентификация стрептококков | Стрептококки, пневмококки и энтерококки

    Род Streptococcus содержит грамположительные кокки, которые обычно расположены в цепочки (см. Цветную табличку 2). Номер виды стрептококков обычно встречаются среди нормальной микрофлоры кожи и слизистых оболочек человека, особенно верхние дыхательные пути. Некоторые виды чаще связаны с инфекционными заболеваниями человека, чем другие.

    Многие стрептококки предъявляют высокие требования к росту, включая необходимость в среде, обогащенной кровью.Большинство растут хорошо на воздухе, но также растут и в отсутствие кислорода (т.е. они факультативных анаэробов ), некоторые предпочитают пониженное давление кислорода и повышенное CO 2 ( микроаэрофильный ), а некоторые растут только в отсутствие кислорода ( анаэробный ). Теперь анаэробные стрептококки помещены в роду Peptostreptococcus . Температура инкубации 35 ° C является оптимальной для роста большинства стрептококков.

    Ряд видов стрептококков продуцируют вещества, разрушающие эритроциты; то есть они вызывают лизис эритроцитов стенка с последующим выбросом гемоглобина.Такие вещества обозначаются как гемолизины . Активность стрептококковых гемолизинов (также известные как стрептолизины) можно легко наблюдать, когда микроорганизмы растут на пластине с кровяным агаром (см. цветную пластину 11). Различные стрептококки по-разному влияют на эритроциты в кровяном агаре. Те, которые вызывают неполный гемолиз и только частичное разрушение клеток вокруг колоний называют альфа-гемолитическими стрептококками . Характерно, что этот тип гемолиза рассматривается как отчетливое озеленение агара в гемолитической зоне, и поэтому эта группа стрептококков также была отнесена к как группа viridans (от латинского слова зеленый ).

    Говорят, что виды, гемолизины которых вызывают полное разрушение эритроцитов в зонах агара, окружающих их колонии. быть бета-гемолитическим . При выращивании на кровяном агаре бета-гемолитические стрептококки представляют собой небольшие непрозрачные или полупрозрачные колонии, окруженные чистыми зонами в непрозрачной среде красного цвета. Один из двух стрептококковых гемолизинов, участвующих в этой реакции. ингибируется кислородом. Его эффект лучше всего проявляется вокруг подповерхностных колоний или при анаэробной инкубации планшетов.Несколько штаммы стафилококков, Escherichia coli и других бактерий также могут проявлять бета-гемолиз.

    Некоторые виды стрептококков не производят гемолизин. Поэтому, когда их колонии растут на кровяном агаре, нет изменения видны в красных кровяных тельцах вокруг них. Эти виды упоминаются как негемолитических стрептококков , хотя раньше они назывались стрептококками гамма . Цветная пластина 28 показывает внешний вид растущих альфа-, бета- и негемолитических стрептококков. как подземные колонии.

    В лаборатории клинической микробиологии наблюдение за гемолизом является важным первым шагом в дифференциации стрептококковые виды. Альфа-гемолитические стрептококки являются членами нормальной флоры горла и не нуждаются в идентификации. далее, когда они изолированы от респираторных культур. Однако у людей с аномалиями сердечного клапана эти стрептококки могут откладываться на клапанах, обычно во время стоматологической работы, когда они имеют возможность проникать и циркулировать через кровоток.Воспалительный процесс, развивающийся на клапане, обозначается как эндокардит и, если его не лечить, представляет опасность для жизни. инфекционное заболевание. У пациентов с эндокардитом рассматривается возможность выделения стрептококков viridans из нескольких культур крови. диагностика эндокардита.

    При обнаружении бета-гемолитических стрептококков в культурах из горла лаборатория должна продолжить определить антигенную группу. Это достигается путем извлечения углеводного антигена из клеточной стенки стрептококка и реакции его со специфическими антителами в тесте латексной агглютинации или иммуноферментном анализе.Самый главный стрептококк группа - это группа А, которая отвечает за стрептококковый фарингит («ангина») и ряд других серьезных кожных заболеваний. инфекции глубоких тканей (см. таблицу 21.1). Видовое название, данное стрептококкам группы А, - pyogenes (гной, характерный зараженной инфекции). Определенные токсины и внеклеточные продукты S. pyogenes вызывают скарлатину, ревматизм. лихорадка и синдром токсического шока, сходный с таковым, вызываемым Staphylococcus aureus.

    В свое время стрептококки группы В ( Streptococcus agalactiae

    .

    Лаборатория стрептококков | StrepLab | Id Strep Species Общие методы Раздел 1

    Раздел I.

    Схема рабочего процесса для Stretococcus Лаборатория

    1. Если культура представляет собой неидентифицированный грамположительный кокк, Enterococcus , viridans Streptococcus или неизвестной идентичности (в основном включает все культуры, кроме пневмококков, ß-гемолитических стрептококков и питательных стрептококков), инокулируйте следующие СМИ.Засейте чашку агара с 5% -ным агаром с триптиказо-соевым агаром, нанося тяжелый посевной материал на одну четверть чашки, а оставшуюся часть - для изолированных колоний. Поместите диск ванкомицина на самую тяжелую часть посевного материала и поместите планшет в сосуд для тушения свечей или инкубатор CO 2 на 18–24 ч при 35 ° C.
    2. Если культура идентифицирована как бета-гемолитический стрептококк или стрептококки группы A, B, C, F или G, засевайте чашку агара с триптиказо-соевым 5% -ным агаром с овечьей кровью и поместите бацитрациновый диск на тяжелую часть нароста.Все чашки необходимо инкубировать в сосуде для тушения свечей или инкубаторе с CO 2 в течение 18 часов при 35 ° C. Для большинства культур, представленных как стрептококки группы А, тех, которые выглядят чистыми в представленной культуре, следует засеять 30 мл и 5 мл бульона Тодда-Хьюитта (THB). Поместите 5 мл THB в инкубатор на 30 ° C или оставьте при комнатной температуре на 1-3 дня. 5 мл THB используют для типирования Т-агглютинации стрептококков группы А. Поместите 30 мл бульона при 35 ° C на 16-18 часов. Не инкубируйте дольше 18 часов.Для бета-гемолитических стрептококков, отличных от группы A, 30 мл THB также можно засеять и поместить при 35 ° C на 18–24 часа. Некоторым штаммам может потребоваться более одного дня инкубации, инкубация этих бульонов более 24–72 часов не причинит вреда. 30 мл THB используется в некоторых случаях для серогруппировки и серотипирования.
    3. Если культура представлена ​​как питательная недостаточность Streptococcus (NVS), засевайте всю чашку триптиказо-соевого кровяного агара культурой. Перпендикулярно этой полосе аккуратно нанесите одну полосу с культурой Staphylococcus aureus .Этот тест определит, образует ли неизвестная культура колонии-спутники, прилегающие к стафилококкам, что характерно для всех NVS. Инкубируйте планшет в CO 2 или в сосуде для тушения свечей при 35 ° C в течение 24–48 часов.
    Примеры необычных или неожиданных результатов:

    Чашки с кровяным агаром, используемые описанным выше способом, предназначены для проверки чистоты культур. Если какие-либо результаты необычны или неожиданны, или если культура загрязнена, тест необходимо повторить.

    Стрептококки, устойчивые к ванкомицину, или другие неизвестные, кроме лейконостоков и педиококков, которые по своей природе устойчивы к ванкомицину.


    AccuProbe- Enterococcus Тест

    1. Принцип
      Тест AccuProbe- Enterococcus используется для помощи в идентификации атипичных энтерококков и помогает дифференцировать штаммы Enterococcus и Lactococcus .
    2. Инокулят
      Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
    3. Реагенты и материалы
      Genprobe Accuprobe Enterococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
    4. Процедура
      Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
    5. Чтение и интерпретация
      Автоматизировано
    6. Ограничения
      Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
    7. Контроль качества
      Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день после определения результатов теста. E. faecalis SS1273 и S. sanguinis SS910 использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

    AccuProbe- Пневмококк Тест

    1. Принцип
      Тест AccuProbe- Pneumococcus используется для помощи в идентификации атипичных пневмококков и для дифференциации штаммов viridans Streptococcus .
    2. Инокулят
      Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
    3. Реагенты и материалы
      Genprobe Accuprobe Pneumococcus Тест идентификации культуры, GEN-PROBE Inc. Сан-Диего, Калифорния
    4. Процедура
      Тест проводится в соответствии с инструкциями, вложенными в пакет.
    5. Чтение и интерпретация
      Автоматизировано
    6. Ограничения
      Будьте осторожны с количеством используемых колоний. Слишком много колоний приведет к ложноположительному результату.
    7. Контроль качества
      Контроль качества, положительные и отрицательные реакции определяются каждый день после определения результатов теста. S. pneumonia и S. sanguinis SS910 используются в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

    Образование кислоты в углеводных бульонах

    1. Принцип
      Способность бактерий образовывать кислоту в некоторых углеводных бульонах, но не в других, может использоваться в схемах идентификации. Если бактерии подкисляют углевод, pH изменится, и индикатор (бромкрезоловый пурпурный) станет желтым.
    2. Инокулят
      Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята.
    3. Реактивы и материалы
      1. Бульон Heart Infusion с 1% углеводов и 0,16 бром-крезоловым пурпурным индикатором. Большинство углеводных бульонов коммерчески доступны (Ремел). Звездочкой отмечены те, которые сделаны CDC media lab.
      2. Пипетка
    4. Процедура
      1. Засейте пробирку углеводного бульона 1-3 каплями посевного материала. 2. Затем пробирку с бульоном инкубируют при температуре 35 ° C в течение до 7 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
    5. Чтение и интерпретация
      Положительная реакция регистрируется, когда бульон становится желтым. Отрицательная реакция - это отсутствие изменения цвета. Определенное изменение цвета, не совсем желтого, можно интерпретировать как слабую положительную реакцию.
    6. Ограничения
      Не инкубируйте в CO 2 , так как это может изменить pH.
    7. Контроль качества
      Каждая партия и партия углеводной бульонной среды при поступлении в лабораторию проверяются на наличие положительных и отрицательных реакций.Штаммы и реакции для каждого бульона перечислены ниже.
    Углеводы Положительная реакция
    Номер штамма
    Отрицательная реакция
    Штамм № вид
    Арабиноза SS-1274, E. faecium SS-1273, E. faecalis
    Глицерин SS-1273, E. faecalis SS-2174, E. faecium
    Инулин SS-1229, E.касселифлавус СС-429. S. mitis
    Лактоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
    Лактоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
    Мальтоза SS-1273, E. faecalis SS-1419, P. acidilactici
    Маннит SS-1273, E.faecalis SS-1419, P. acidilactici
    Мелебиоза SS-1229, E. casseliflavus SS-1273, E. faecalis
    * м-α-D-глюкопиранозид SS-1229, E. casseliflavus SS-1273, E. faecalis
    * Пуллулан SS-1633, G. balaenoptera SS-1138, G. adiacens
    Рафиноза SS-1229, E.касселифлавус SS-1273, E. faecalis
    Рибоза SS-1273, E. faecalis SS-1317 E. casseliflavus
    Сорбит SS-1273, E. faecalis SS-1227, E. hirae
    Sorbose SS-817, E. avium SS-1273, E. faecalis
    Сахароза SS-1273, E.faecalis SS-1419, P. acidilactici
    * Тагатоза SS-1138, G. adiacens SS-1633, G. balaenoptera
    трегалоза SS-1273, E. faecalis SS-1344, S. equi
    Ксилоза SS-1503, E. porcinus SS1404, E. ratti

    Начало страницы

    Гидролиз аргинина

    1. Принцип
      Некоторые бактерии содержат ферменты, гидролизующие аргинин.Этот гидролиз приводит к щелочному изменению среды, что приводит к изменению цвета среды. Этот тест можно использовать для дифференцированных различных бактерий.
    2. Инокулят
      Капля бульонной культуры Тодда Хьюитта, выращенная в течение ночи, является предпочтительным инокулятом. В качестве альтернативы в качестве инокулята можно использовать суспензию в бульоне Тодда Хьюитта, образовавшегося в результате роста на чашке, или небольшого количества роста на чашке.
    3. Реактивы и материалы
      1. Декарбоксилазный бульон Мёллера, содержащий аргинин.Среда имеется в продаже.
      2. Пипетка или петля
    4. Процедура
      1. Добавьте 1-3 капли культуральной суспензии в пробирку с декарбоксилазной средой Мёллера, содержащей аргинин.
      2. Немедленно покрыть стерильным минеральным маслом (примерно 1-2 мл).
      3. Среду инкубируют при температуре 35 ° C до 7 дней на воздухе. (Некоторые привередливые организмы могут удерживаться до 14 пенсов.)
    5. Считывание и интерпретация
      Регистрируется положительная реакция, когда бульон приобретает темно-фиолетовый цвет, указывая на щелочную реакцию, выделяется NH 3 .Появление желтого цвета или отсутствие изменения цвета бульона свидетельствует об отрицательной реакции.
    6. Контроль качества
      Каждая новая партия и партия среды проверяется на наличие положительных и отрицательных реакций. E. faecalis штамм SS1273 используется для определения положительных реакций, а S. avium штамм SS817 используется для определения отрицательных реакций.

    Начало страницы

    Тест на бацитрацин

    1. Принцип
      Бацитрациновый диск - это тест на чувствительность, используемый для дифференциации бета-гемолитического Streptococcus .
    2. Инокулят
      Ночная культура, выращенная на 5% агаре с овечьей кровью, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
    3. Реактивы и материалы
      1. бацитрациновый диск «А» (BBL)
    4. Процедура
      1. Выберите бета-гемолитическую колонию и обильно засевайте квадрант чашки с агаром с 5% овечьей кровью.
      2. Бросьте диск «А» в самую тяжелую зону посева.
      3. Слегка постучите по диску, чтобы убедиться, что он прилегает к агару.
      4. Инкубируйте планшет в течение ночи в CO 2 при 35 ° C.
    5. Чтение и интерпретация
      Любая зона подавления считается положительным или чувствительным тестом. Рост до края диска интерпретируется как отрицательный тест или тест на устойчивость.
    6. Ограничения
    7. Контроль качества
      Контроль качества проводится для каждой партии и партии бацитрацинового диска. Streptococcus pyogenes - положительный (чувствительный контроль), а Enterococcus faecalis SS1273 - резистентный или отрицательный контроль.Результаты заносятся в журнал контроля качества.

    Тест на эскулин желчи

    1. Принцип
      Селективная и дифференциальная среда, используемая для идентификации каталазонегативных бактерий. Селективный агент желчи, подавляет большинство грамположительных бактерий. Энтерококки и Streptococcus , bovis будут расти. Эскулин в среде гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с хлоридом железа в среде, образуя черно-коричневый цвет.
    2. Инокулят
      Ночная культура в бульоне Тодда Хьюитта, инкубированная в течение ночи при 35 ° C, или свежая бактериальная суспензия в бульоне Тодда Хьюитта может использоваться в качестве инокулята. Также можно использовать инокуляционную петлю с культурой.
    3. Реактивы и материалы
      1. Желчный эскулин наклонный (Remel)
    4. Процедура
      1. Пробирка для посева с 1 каплей посевного материала, позволяющая капле стечь под наклоном. В качестве альтернативы, скошенный сент может быть засеян петлей роста из чашки с кровяным агаром.
      2. Затем скос инкубируют при 35 ° C в течение 2 дней на воздухе. Придирчивые организмы могут содержаться до 14 дней.
    5. Чтение и интерпретация
      Тест на эскулин желчи дает положительный результат, когда черный цвет образует более половины или более уклона. Если почернения не происходит, тест отрицательный.
    6. Ограничения
      Не инкубируйте среду в атмосфере двуокиси углерода. Повышение C0 2 приведет к лучшему росту стрептококков viridans и увеличит вероятность положительной реакции на БЭ. Streptococcus bovis и энтерококки не требуют C0 2 для хорошего роста.
    7. Контроль качества
      Положительные и отрицательные реакции определяются для каждой новой партии и каждой партии носителя. Enterococcus faecalis штамм SS-1273 используется для реакций положительного контроля, а штамм Streptococcus sanguinis SS-910 используется для реакций отрицательного контроля. Результаты заносятся в журнал контроля качества.

    Начало страницы

    Тест на растворимость желчи

    1. Принцип
      Цель теста на растворимость в желчи - помочь в дифференциации S.pneumonia e от всех других альфа-гемолитических стрептококков. Дезоксихолат натрия (2%) действует на клеточную стенку пневмококков, вызывая лизис.
    2. Инокулят
      Ночная культура, выращенная на кровяном агаре, инкубированная при 35 ° C в CO 2 .
    3. Реактивы и материалы
      1. 2% дезоксихолат (Центральная сервисная лаборатория CDC, формула № 5333)
      2. физиологический раствор pH 7,0 Стеклянная трубка 3,13 X 100 мм
    4. Процедура
      1. Сделайте 1,0 мл физиологической суспензии клеток, выращенных на чашке с агаром.Следует использовать мутность, равную стандарту плотности МакФарланда от 1,0 до 2,0.
      2. После достижения удовлетворительной плотности суспензию разделите на 2 пробирки по 0,5 мл в каждой.
      3. Добавьте 0,5 мл 2% дезоксихолата натрия (соли желчных кислот) в одну пробирку и 0,5 мл физиологического раствора в другую. Перемешать интенсивным встряхиванием.
      4. Инкубируйте пробирки при 35–37 ° C до 2 часов.
    5. Чтение и интерпретация
      Периодически проверяйте наличие мутности.Удаление помутнения в желчной трубке, но не в контрольной пробирке с физиологическим раствором, указывает на положительный результат теста, т.е. клетки пневмококка лизировались («растворялись»). Если трубка, содержащая клетки и желчь, не очистилась, тест отрицательный. Иногда некоторые штаммы пневмококков только частично растворяются в солях желчных кислот, то есть происходит частичное очищение. Эти штаммы должны иметь соответствующую зону ингибирования вокруг оптохинового теста, чтобы их можно было назвать пневмококками. Частично растворимые штаммы с зонами ингибирования менее 14 мм не считаются пневмококками.
    6. Ограничения
      Мутность должна быть достаточной, чтобы определить разницу в контрольной пробирке с физиологическим раствором.
    7. Контроль качества
      Каждая новая партия дезоксихолата тестируется на наличие положительных и отрицательных реакций с использованием штамма S. pneumonia e АТСС-49619 (положительный результат) и штамма S. mitis SS-429 (отрицательный результат). Результаты заносятся в журнал контроля качества.

    Начало страницы

    Camp Test

    1. Принцип
      Некоторые бактерии продуцируют фактор САМР (диффундирующий внеклеточный белок), который синергетически действует с бета-лизином Staphylococcus aureus и усиливает лизис красных кровяных телец.Целью теста CAMP является помощь в идентификации негемолитических стрептококков группы B и других ß-гемолитических стрептококков.
    2. Инокулят
      Рост из чашки с кровяным агаром или любой твердой среды.
    3. Реактивы и материалы
      TSA-агар с овечьей кровью
    4. Процедура
      1. CAMP-тест проводится на агаре с овечьей кровью TSA. Одиночная полоска ß-лизина, продуцирующая S. aureus , проходила по центру пластины. Штамм SS-695 (номер лаборатории Strep. Lab представляет собой штамм-продуцент ß-лизина S.aureus .
      2. Отдельную колонию неизвестного штамма (бета-гемолитических стрептококков) собирают с помощью инокуляционной петли и используют для создания одной полосы перпендикулярно, но не касаясь полосы S. aureus . Между полосами должно оставаться расстояние 2-3 мм.
      3. Инкубируйте засеянный планшет в нормальной атмосфере в течение ночи при температуре 35 ° C. Стрептококки группы B и некоторые другие бета-стрептококки вызывают усиление активности ß-лизина штамма S. aureus .
    5. Чтение и интерпретация
      Это расширенное упражнение имеет форму наконечника стрелки на стыке двух полос, причем самая широкая часть наконечника стрелки находится на стороне группы B.
    6. Ограничения
      Не инкубируйте в анаэробной среде или при CO. 2 . Некоторые штаммы S. pyogenes дают положительную реакцию при инкубации в CO 2 .
    7. Контроль качества
      Коммерчески доступный агар TSA с овечьей кровью не всегда демонстрирует правильную реакцию CAMP.Поэтому необходимо тестировать известный стрептококк группы B на реакцию CAMP в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине. Штамм стрептококка группы B SS-617 следует использовать в качестве положительного контроля на каждой тестовой пластине.

    Начало страницы

    Тест каталазы

    1. Принцип
      Перекись водорода (H 2 O 2 ) используется для определения того, продуцируют ли бактерии фермент каталазу.
    2. Посевной материал
      Культуры, выращенные на среде, не содержащей крови, или колония, выращенная на чашке с кровяным агаром, которую осторожно переносят на предметное стекло без переноса каких-либо эритроцитов.Культуры обычно выращивают в течение ночи при 35 ° C в CO 2 .
    3. Реактивы и материалы
      1. Трехпроцентный перекись водорода получают в коммерческой аптеке.
      2. Пипетка
      3. Слайды
    4. Процедура
      1. Тест на каталазу лучше всего выполнять, залив рост бактерий (обычно на скошенном агаром, но можно использовать чашки с агаром без крови) 1,0 мл 3% перекиси водорода и наблюдая за вскипанием (пузырьками), что указывает на положительный тест.Бактерии необходимо выращивать на среде, не содержащей крови.
      2. Модификации теста каталазы могут быть pe
    .

    Лаборатория стрептококков | StrepLab | Id Strep Species Общие методы Раздел 2

    Раздел II.

    Идентификация грамположительных, отрицательных по каталазе кокков

    Следующие роды идентифицированы в Справочной лаборатории Streptococcus . Существует три основных причины увеличения числа родов, которые клинический микробиолог должен определить. Сначала генетические исследования систематиков прояснили родство некоторых родов. Энтерококки и лактококки были выделены из рода Streptococcus .Исследования гомологии ДНК показали, что эти два рода являются отдельными и разными сущностями. Кроме того, вагококки были выделены из рода Lactococcus на том же основании. Тетрагенококки были отделены от рода Pediococcus , потому что он также генетически отличается от других представителей этого рода.

    Leuconostoc s и педиококки считались непатогенными до середины 1980-х годов. Считается, что увеличение использования ванкомицина привело к увеличению изоляции видов этих двух родов.Все виды родов Leuconostoc и Pediococcus обладают внутренней устойчивостью к ванкомицину. Ванкомицин устраняет все чувствительные штаммы, позволяя устойчивым штаммам колонизировать мочеполовой тракт.

    Список названий видов стрептококков для каждого из перечисленных ниже родов см. В Списке названий прокариот, стоящих во внешней номенклатуре (LPSN).

    Окрашивание по Граму кокка, отрицательного по каталазе и кокковидной палочки, родов

    Родственные роды, коккобациллярные и палочковидные

    В таблице 1 перечислены признанные в настоящее время роды факультативно анаэробных грамположительных кокков.

    После того, как определено, что рассматриваемые бактерии являются грамположительными, каталазонегативными кокками, следующим шагом является определение того, к какому роду принадлежит штамм. Роды, которые идентифицированы этой лабораторией, включают: Enterococcus , Leuconostoc / Weissella , Streptococcus , Pediococcus , Tetragenococcus 9000cus8, Aerococcus 9000cph000, 000 80007000800080008 , Granulicatella , Globicatella sanguinis , Dolosicoccus paucivorans . Alloiococcus , Dolosigranulum , Facklamia и Ignavigranum видов.

    Первоначальное разделение на соответствующие роды выполняется путем определения физиологических характеристик, перечисленных в таблице 1. Степень тестирования каждого бактериального штамма зависит от источника штамма. Если штамм получен из обычно стерильного места, следует применить все перечисленные ниже тесты. В некоторых случаях нет необходимости применять все тесты; я.е., бета-гемолитические стрептококки и пневмококки. Существуют специальные тесты, которые клинический микробиолог проводит при подозрении на эти патогены. Эти ситуации и тесты будут рассмотрены в разделе о стрептококках.

    Таблица 1. Фенотипические характеристики факультативно анаэробных, каталазонегативных, грамположительных кокков

    Фенотипическая характеристика факультативно анаэробных, каталазонегативных, грамположительных кокков
    Род Грамм a морилка Фенотипическая характеристика b
    ФУРГОН ГАЗ BE PYR LAP NaCl 10 ° С 45 ° С НЕМ
    Enterococcus группа c шасси S / R + + + + + + д α / γ
    Leuconostoc / Weissella e шасси R + В + В + В- В- α / γ
    Стрептококк шасси S - f - г + В- В- α / β / γ
    Питательная вар.Strep ч шасси S + + В- α / γ
    Необычные стрептококки / роды i шасси S В + В + В + В + В- В- α / γ
    Педиококк мл / т R + + В- В + α
    Тетрагенококк мл / т S + + + + α
    Aerococcus 9000 8 видов j мл / т S В + В + В- + В- α
    Гелькококк мл / т S + + + γ
    Gemella л / т / ч S + + γ
    Солеустойчивый Gemella -подобный k л / т / ч S + + + γ

    Начало страницы

    Стрептококк

    Несмотря на разделение этого рода на стрептококки, энтерококки и лактококки, он все еще остается очень разнообразной группой бактерий.Различные виды встречаются во всех видах человеческих инфекций, а также являются комменсальными организмами в полости рта и мочеполовых путях. Как указано выше, существуют определенные ситуации, когда нет необходимости определять все тесты, перечисленные в таблице 2. Первая ситуация, когда наблюдается s-гемолиз. Это особенно заметно при использовании мазков из зева. s-гемолиз является таким хорошим индикатором среди грамположительных кокков с отрицательной каталазой, что после определения того, что неизвестный изолят является грамположительным, каталазонегативным и β-гемолитическим, вы можете применить тесты, перечисленные в таблице 2, для идентификации видов стрептококков, чтобы определить, какие виды стрептококков вид Streptococcus присутствует.Остальные тесты в таблице 2 определять не нужно. Вторая ситуация возникает, когда клинический микробиолог определяет, присутствует ли S. pneumoniae в различных жидкостях организма. Если неизвестный штамм является каталазо-отрицательным, грамположительным и бета-гемолитическим, тогда могут быть применены тесты, используемые для идентификации пневмококков (таблица 5). Во всех других ситуациях необходимо выполнить все тесты, перечисленные в таблице 2, чтобы определить, является ли неизвестный штамм Streptococcus .Все стрептококки; чувствительны к ванкомицину, не образуют газа из бульона MRS, продуцируют LAP, не растут при 10 ° C и неподвижны. Среди стрептококков стрептококки группы А, S. porcinus , S. iniae и стрептококки с вариантами питания являются PYR-положительными. В случае стрептококков группы А тест PYR является отличным тестом для предположительной идентификации стрептококков группы А. Не-бета-гемолитические стрептококки (viridans и неэнтерококковая группа D) не растут в 6.5% бульон NaCl; но некоторые из бета-гемолитических штаммов могут расти в бульоне. Штаммы стрептококков bovis обычно растут при 45 ° C, а штаммы стрептококков viridans обычно не растут. Ss-гемолитические штаммы демонстрируют различные модели роста при 45 ° C. Стрептококки могут быть альфа-, бета- или негемолитическими. Реакция гемолиза в чашках с кровяным агаром используется для дифференциации стрептококков.

    Энтерококк

    Генетическое свидетельство того, что S. faecalis и S.faecium значительно отличался от других представителей рода Streptococcus , предоставленных Шлейфером и Килппером-Бальцем в 1984 году. Прошло несколько лет после этого предложения, и общепринято считать, что род Enterococcus действителен и используется в опубликованная литература. С 1984 г. было предложено включить 25 других видов в род Enterococcus . Генетические доказательства этих предложений были предоставлены гибридизацией ДНК-ДНК и ДНК-рРНК, а также секвенированием рибосомной РНК 16S с помощью обратной транскриптазы.Энтерококки - одни из самых распространенных известных бактерий. Они содержатся в окружающей среде, мочеполовых путях человека и других животных, а также в большинстве пищевых продуктов. Эти бактерии не очень инвазивны, но являются значительными оппортунистами. Энтерококки обычно чувствительны к ванкомицину, но в последнее время многие штаммы приобрели устойчивость, а в некоторых случаях большинство идентифицированных штаммов могут быть устойчивыми к ванкомицину из-за нозокомиальной передачи штаммов. Устойчивость к ванкомицину не мешает идентификации штаммов, потому что только Leuconostoc s и педиококки по своей природе устойчивы к ванкомицину, но все виды этих двух родов являются PYR-отрицательными.Таким образом, единственными штаммами, устойчивыми к ванкомицину и положительными по PYR, являются энтерококки. Лишь изредка штаммы энтерококков (менее 0,5%) выделяют газ из бульона MRS. Почти все штаммы продуцируют LAP, растут в 6,5% NaCl и растут при 10–45 ° C. Некоторые штаммы E. avium или E. raffinosus не растут при 10 ° C и не продуцируют LAP, но это не является последовательным или предсказуемым. Некоторые виды подвижны. Большинство штаммов альфа- или негемолитические; иногда ß-гемолитические штаммы E.faecalis или E. durans .

    Лактококк

    Перенос видов молочнокислых стрептококков, формально известных как стрептококки группы N, в род Lactococcus был произведен в 1985 году. Виды, входящие в этот род, считаются непатогенными для человека. Фактически L. lactis ( S. lactis ) и L. cremoris ( S. cremoris ) используются в молочной промышленности и входят в состав пищевых продуктов.Мы идентифицировали несколько штаммов лактококков из человеческих источников, но клиническое значение этих штаммов не было оценено.

    Лактококки, формально называемые молочной группой стрептококков или стрептококками группы N, не считались патогенными для человека. Многие штаммы лактококков используются при производстве продуктов питания, например, сыра. Однако несколько подтвержденных случаев инфекций, включая эндокардит, были приписаны штаммам лактококков. Считается, что естественной средой обитания лактококков является окружающая среда.Физиологические характеристики лактококков очень похожи на энтерококки, и большинство штаммов лактококков, ассоциированных с человеческими инфекциями в нашей коллекции культур, теперь идентифицированных как лактококки, первоначально были идентифицированы как энтерококки. Одним из критериев, ранее использовавшихся для различения энтерококков и лактококков, была неспособность лактококков расти при 45 ° C. Однако с включением новых видов в родов Lactococcus , т.е. е., L. garvieae , некоторые штаммы лактококков растут при 45ΕC.Все лактококки: чувствительны к ванкомицину, не выделяют газа в бульоне MRS, растут при 10 ° C и неподвижны. Все штаммы дают положительные реакции LAP, и большинство штаммов дают положительные реакции PYR, однако некоторые штаммы L. lactis отрицательны. Различные реакции наблюдаются в тесте на толерантность к 6,5% NaCl. Ни один из штаммов не является бета-гемолитическим.

    Вагококк

    Штаммы вагококка редко выделяются от инфекций человека. Штаммы вагококков были выделены из рода Lactococcus .Эти организмы ранее были известны как подвижные лактококки. Фактически, только подвижность, характерная для вагококков, отличает вагококки от лактококков. Эти бактерии включены в идентификацию энтерококков из-за фенотипического сходства.

    Leuconostoc

    Когда-то считалось, что Leuconostoc s, как и лактококки, не вызывают инфекции у человека. Однако имеется много сообщений об инфекциях человека, вызываемых различными видами Leuconostoc .Виды рода Leuconostoc являются единственными грамположительными кокками с отрицательной каталазой, выделяющими газ из бульона MRS. Как указывалось ранее, все штаммы по своей природе устойчивы к ванкомицину. Все штаммы Leuconostoc s отрицательны в тестах PYR и LAP. Сочетание реакций, устойчивости к ванкомицину и отрицательных PYR и LAP является отличным индикатором идентификации Leuconostoc . Ни один другой каталазонегативный и грамположительный кокки не обладает такими характеристиками.Как и лактококки, Leuconostoc s растут при 10 ° C, но очень плохо, если вообще не растут при 45 ° C. Некоторые штаммы растут в бульоне с 6,5% NaCl, а другие нет. Ни один из штаммов не является подвижным и ни один из них не является β-гемолитическим.

    Педиококк

    Как и Leuconostoc s, педиококки обладают внутренней устойчивостью к ванкомицину. Они тоже считались непатогенными для человека, но есть несколько сообщений, указывающих на то, что это меняется. Штаммы Pediococcus очень похожи на стрептококки viridans на среде с кровяным агаром и могут быть легко ошибочно идентифицированы как стрептококки viridans.Все протестированные штаммы педиококков были устойчивы к ванкомицину, а все штаммы стрептококков viridans были чувствительны к ванкомицину. Педиококки не образуют газ в бульоне MRS, они PYR-отрицательные, но LAP-положительные, некоторые штаммы растут в 6,5% -ном бульоне NaCl, а другие нет. Большинство штаммов растут при 45 ° C, но не при 10 ° C. Все штаммы неподвижны и кажутся α-гемолитическими на чашках с кровяным агаром

    Глобикателла

    Этот новый род грамположительных кокков был описан совсем недавно.Происхождение этого рода происходит из коллекции виридансоподобных стрептококков, наиболее похожих на Streptococcus uberis . Globicatella отличается от стрептококков viridans тем, что все штаммы Globicatella были PYR-положительными, LAP-отрицательными и растут в бульоне, содержащем 6,5% NaCl, в то время как все виды viridans являются PYR-отрицательными, LAP-положительными и не могут расти в 6,5% NaCl. . Все штаммы, идентифицированные на сегодняшний день, были чувствительны к ванкомицину, PYR-положительные, LAP-отрицательные, рост у 6.5% -ный раствор NaCl, не растут при 10 или 45 ° C, неподвижны и являются α-гемолитическими.

    Тетрагенококк

    Этот род содержит только один вид. T. halophilus ранее был идентифицирован как Pediococus halophilus. Тетрагенококки отличаются от педиококков устойчивостью к ванкомицину. Педиококки устойчивы к ванкомицину, а тетрагенококки чувствительны к ванкомицину. Остальные характеристики аналогичны.

    Gemella и Gemella - как

    Эти бактерии очень плохо растут на чашках с кровяным агаром, и для их роста часто требуется 48 часов.Эти бактерии также могут напоминать стрептококки viridans; иногда тетрады не образуются, и в пятне по Граму наблюдаются только пары и короткие цепочки. Один вид был ранее идентифицирован как стрептококки, G. morbillorum . На чашках с кровяным агаром некоторые штаммы после продолжительной инкубации дают широкозонную альфа-гемолитическую реакцию. Идентифицировать эти бактерии сложно, и, возможно, потребуется определить расширенный набор физиологических характеристик, прежде чем станет возможным окончательная идентификация.Эти бактерии являются типично отрицательными в большинстве тестов, перечисленных в таблице 1. Некоторые штаммы являются положительными как в тестах PYR, так и в LAP, но другие штаммы могут не дать положительной реакции ни в одном из них. Солеустойчивые роды Gemella включают Alloiococcus , Dolosigranulum , Facklamia и Ignavigranum .

    Аэрококк

    Aerococcus sp. чувствительны к ванкомицину, не образуют газ из глюкозы и, как правило, являются PYR-положительными, но являются LAP-отрицательными.Все штаммы растут в бульоне, содержащем 6,5% NaCl, но не растут при 10 или 45 ° C. Штаммы неподвижны и сильно α-гемолитичны. Штаммы хорошо растут на среде кровяного агара и образуют колонии несколько меньше, чем энтерококки, но больше, чем стрептококки viridans, после инкубации в течение ночи.

    Аллоиококк

    В настоящее время известен только один вид этого рода - A. otitidis . Эти бактерии были выделены из ушной жидкости детей с отитом.Как и Gemella e, эту бактерию трудно выращивать. Часто для развития роста на чашках с кровяным агаром кролика требуется от 2 до 3 дней. Аллоиококки чувствительны к ванкомицину, не образуют газа в бульоне MRS и являются PYR- и LAP-положительными. Они отличаются от Gemella e тестом на 6,5% NaCl. Аллоиококки растут в 6,5% бульоне, а Gemella e - нет. Эти бактерии не растут при температуре 10–45 ° C или в тиогликолятном бульоне, неподвижны и негемолитичны на чашках с кровяным агаром.

    Гелькококк

    В настоящее время известны два вида этого рода. H. kurzii - единственный изолированный от человека. Эти бактерии были изолированы от раневых инфекций. Подобно аллоиококкам и Gemella e, эти бактерии очень медленно растут на среде кровяного агара. По физиологическим характеристикам хелококки аналогичны аэрококкам в том, что они являются PYR-положительными, LAP-отрицательными и растут в бульоне, содержащем 6,5% NaCl. Эти бактерии растут медленнее и не являются α-гемолитическими на кровяном агаре, тогда как аэрококки легко растут и являются α-гемолитическими на кровяном агаре.Как и Aerococci, эти штаммы чувствительны к ванкомицину, не образуют газа в бульоне MRS и не могут расти при 10–45 ° C. Все изоляты неподвижны.

    Вариант питания Streptococcus

    Вариантные по питанию стрептококки (NVS) можно идентифицировать, продемонстрировав, что штамм требует пиридоксаля или растет на чашке с агаром только при наличии бактерий-спутников. В дополнение к этому требованию NVS также дает положительные тесты PYR, которые помогают дифференцировать эти штаммы от стрептококков viridans.

    Начало страницы

    Идентификация видов стрептококков

    ß-гемолитические стрептококки

    Самый удобный способ начать идентификацию стрептококков - это определить уровень гемолиза бактерий на пластинах с кровяным агаром. Как упоминалось ранее, методы определения гемолиза подробно описаны в; Выделение и идентификация стрептококков, Часть 1. Сбор, транспортировка и определение гемолиза, Приложение 1. После разделения стрептококков на бета-гемолитические и не-бета-гемолитические категории может быть проведена дифференциация на виды, группы и категории.Идентификация большинства ß-гемолитических штаммов осуществляется путем определения антигенных характеристик культуры; но идентификация не-гемолитических штаммов выполняется путем определения антигенных и физиологических характеристик культуры

    Стрептококки группы A: группа A Лансфилда Streptococcus также известен как Streptococcus pyogenes . Идентификация подтверждается демонстрацией присутствия антигена группы А на стрептококковых клетках.Все S. pyogenes имеют антиген группы А; но не все стрептококки с антигеном группы A представляют собой S. pyogenes . Некоторые штаммы S. anginosus и S. dysgalactiae subsp. equisimilis также может иметь антиген группы А. Штаммы, не относящиеся к пиогенам, растут медленнее и образуют более мелкие колонии, чем штаммы S. pyogenes . Если ß-гемолитические колонии кажутся маленькими и рост задерживается, или для роста требуется углекислый газ, или если штамм группы A является PYRase-отрицательным, микробиолог должен подозревать, что штамм может быть S.anginous или S. dysgalactiae subsp. equisimilis , независимо от групповой реакции. Когда это происходит

    .

    Морфология и культурные характеристики Streptococcus pyogenes

    МОРФОЛОГИЯ ПИОГЕНОВ СТРЕПТОКОККА

    Форма - Streptococcus pyogenes - это бактерия круглой формы (кокк)

    Размер - Размер Streptococcus pyogenes составляет примерно 0,5–1 мкм (диаметр)

    Расположение ячеек - S. pyogenes организован в цепочки

    Подвижность - S.pyogenes - неподвижная бактерия.

    Жгутик - Streptococcus pyogenes - не флагеллированная бактерия

    Споры - S. pyogenes - неспоровая бактерия

    Капсула - присутствует у некоторых видов Streptococcus

    Реакция окрашивания по Граму - Грамм + ве бактерия

    ТРЕБОВАНИЯ К КУЛЬТУРЕ ПИОГЕНОВ STREPTOCOCCUS

    Особые требования - Streptococcus pyogenes требует обогащенной среды для роста и легко растет в среде, содержащей кровь, сыворотку или сахар, обычно среда с кровяным агаром используется для культивирования Streptococcus pyogenes .

    Оптимальная температура - S. pyogenes лучше всего растет при 37 ° C

    Оптимальный pH - 7,4-7,6

    Потребность в кислороде - Streptococcus pyogenes является аэробной и факультативной анаэробной бактерией, то есть может переносить высокий уровень кислорода, а также легко расти в среде с низким уровнем кислорода. Присутствие 5-10% СО2 способствует росту и гемолизу среды.

    ⇒ Существует различных питательных сред, используемых для выращивания Streptococcus pyogenes в лаборатории, и чаще всего используется кровяной агар и среда PNF, среды следующие -

    • Питательный агар, среда
    • Среда для агара с овечьей кровью
    • Среда кристально-фиолетового кровяного агара (селективная среда )
    • Среда
    • PNF также является селективной культурной средой для выделения Streptococcus pyogenes
    • Жидкая среда (питательная бульонная среда, среда TSB, пептонная вода и т. Д.)

    ⇒ Среда PNF, которая представляет собой Селективную среду для Streptococcus pyogenes , может быть приготовлена ​​путем включения сульфата полимиксина B, сульфата неомицина и фузидиевой кислоты в среду агара с конским кровяным агаром для роста Streptococcus . pyogenes .

    Ознакомьтесь с морфологическими и культурными характеристиками Staphylococcus aureus

    МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И КУЛЬТУРНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ STAPHYLOCOCCUS AUREUS

    КУЛЬТУРНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПИОГЕНОВ СТРЕПТОККУСА

    Культурные характеристики NAM (питательная агаровая среда Кровяной агар (BAM) Кристаллическая фиолетовая кровяная среда (CVBA)
    Форма Круглая (Точечная точка) Круглая (Точечная точка) Круглая (Точечная точка) Круглая (Точечная точка)
    Размер 0.5-1 мм 0,5-1 мм 0,5-1 мм 0,5-1 мм
    Высота Низкая выпуклая - выпуклая Низкая выпуклая Низкая выпуклая Низкая выпуклая
    Поверхность Матовый (в вирулентных штаммах); Глянцевый (в невирулентных штаммах); слизистый (в случае производства капсул) Matt (в вирулентных штаммах); Глянцевый (в невирулентных штаммах); слизистый (в случае производства капсул) Matt (в вирулентных штаммах); Глянцевый (в невирулентных штаммах); слизистый (в случае производства капсул) Matt (в вирулентных штаммах); Глянцевый (в невирулентных штаммах); слизистая (в случае изготовления капсул)
    Цвет Светло-желтый Светло-золотисто-желтый, в окружении прозрачной зоны (бета-гемолиз). Желтый Золотисто-желтый, в окружении прозрачной зоны (бета-гемолиз).
    Структура Полупрозрачный - Непрозрачный Полупрозрачный Полупрозрачный - Непрозрачный Полупрозрачный - Непрозрачный
    Гемолиз ----- β - Гемолиз β - Гемолиз β - Гемолиз
    STREPTOCOCCUS ПИОГЕНЫ НА СРЕДЕ ДЛЯ КРОВИ КОЛУМБИЙСКОЙ ЛОШАДИ

    В жидких культуральных средах, таких как пептонная вода и питательный бульон или бульон глюкозы, рост бактерий происходит в виде гранулированного помутнения с порошкообразным осадком, который возникает из-за оседающих тяжелых бактериальных цепей. вниз и выглядит как порошкообразный осадок, который затем анализируется на морфологию (под микроскопом), грамм-реакцию, биохимические тесты и специфические тесты Streptococcus pyogenes .

    Привет, я основатель и разработчик Paramedics World, блога, посвященного фельдшерам. Я техник в медицинской лаборатории, веб-разработчик и библиофил. Мое самое большое хобби - обучать и мотивировать других людей делать то, что они хотят делать в жизни.

    .

    Смотрите также

© 2020 nya-shka.ru Дорогие читатели уважайте наш труд, не воруйте контент. Ведь мы стараемся для вас!