• Выделение чистой культуры пиогенных стрептококков


    Пиогенные (гноеродные) стрептококки


    Стр 1 из 6Следующая ⇒

    Раздел 3

    1 Морфология, культуральные, биохимические свойства.Стафило­кокки имеют шаровидную форму, в чистой культуре располагаются в виде гроздьев винограда, в мазках из гноя располагаютсяя поодиночке, попарно, небольшими скоплениями (цветная вклейка рис. 25). Факуль­тативные анаэробы, лучше растут в аэробных условиях, при рН 7,2-7,8, на простых питательных средах. Оптимальная температура для роста 37оС.

    В жидких питательных средах образуют равномерное помутнение, на плотных средах образуют гладкие, выпуклые, блестящие, с ровными краями колонии. Благодаря образованию пигмента колонии могут быть золотистого, палевого, лимонно-желтого, белого цвета. Пигментообразование лучше всего выражено на средах с добавлением молока. Ста­филококки могут размножаться на средах с большим количеством (8-10%) хлорида натрия, поэтому солевые среды применяются в качестве элективных: молочно-солевой агар, желточно-солевой агар.

    Стафилококки сбраживают углеводы с образованием кислоты без газа, обладают протеолитическими свойствами. S. aureus отличаются от двух других видов тем, что продуцируют фермент, вызывающий свер­тывание плазмы крови (плазмокоагулазу), ферментируют маннит в ана­эробных условиях, продуцируют токсины и ферменты патогенности (табл. 4).

    Наличие пигмента не является таксономическим признаком.

    Антигены.Стафилококки содержат целый ряд полисахаридных и белковых антигенов. Классификация по антигенной структуре не по­лучила практического применения.

    Фаговары.По чувствительности к типовым бактериофагам ста­филококки делятся на фаговары. Фаготипирование проводится с по­мощью международного набора бактериофагов.

    Токсинообразование.Патогенные стафилококки продуцируют эк­зотоксины. Гемолизины вызывают гемолиз эритроцитов разных видов животных и человека. Основным из них является альфа-гемолизин, на ос­нове которого приготовлен стафилококковый анатоксин. Стафило­кокки, продуцирующие гемолизин, образуют на кровяном агаре коло­нии, окруженные бесцветной зоной гемолиза. Лейкоцидины разруша­ют лейкоциты. Эксфолиатины вызывают пузырчатку новорожденных, отслойку эпителия кожи с образованием пузырей, "синдром ошпарен­ной кожи". Обнаружен токсин, вызывающий токсический шок (ТТШ). Энтеротоксины, вызывающие пищевую интоксикацию, в отличие от других экзотоксинов, термостабильны, не разрушаются при кипячении.

    Ферменты, обладающие патогенным действием: гиалуронидаза, лецитиназа, плазмокоагулаза.

    Стафилококки, устойчивые к пенициллину и другим b-лактамным антибиотикам, продуцируют b-лактамазу.

     

    дырка

     

    ях, при постоянной циркуляции стафилококков среди больных могут формироваться так называемые "госпитальные" стафилококки опре­деленных фаготипов, высоковирулентные, обладающие множественной лекарственной устойчивостью, нечувствительные к дезинфицирующим средствам. Особенно большое значение в возникновении внутрибольничных инфекций имеют стафилококки, устойчивые к пенициллину, метициллину.

    Заболевания у человека.Стафилококковые заболевания чаще воз­никают в результате заражения извне, реже - как эндогенная инфекция.

    Стафилококки, главным образом, S. epidermidis, являются предста­вителями нормальной микрофлоры кожи человека, дыхательных пу­тей и пищеварительного тракта.

    У здоровых людей довольно часто встречается носительство S. aureus, главным образом, на слизистой оболочке носа. Установлено, что только небольшая часть людей постоянно свободна от золотистого стафилококка. У большинства они обнаруживаются периодически, часть людей являются постоянными бактерионосителями. Имеется ка­тегория носителей, у которых постоянно и в большом количестве оби­тают S. aureus с признаками "госпитальных" штаммов. Такие носите­ли, особенно среди медицинского персонала, а также больные со ста­филококковыми заболеваниями, являются основным источником ста­филококковых инфекций в больницах.

    Инфекция передается, главным образом, контактным путем или через воздух.

    Стафилококки вызывают разнообразные гнойно-воспалительные заболевания: гнойничковые поражения кожи и подкожной клетчатки, ангины, отиты, пневмонии, уретриты, холециститы, энтероколиты, сеп­сис и т.д. Особенно велика их роль в акушерской практике и в хирур­гии. Стафилококки нередко являются причиной гнойно-воспалительных заболеваний у новорожденных, маститов у рожениц, гнойных после­операционных осложнений, постинъекционных абсцессов. Возбу­дителями чаще всего являются S. aureus.

    S. epidermidis вызывает заболевания такие, как инфекционный эн­докардит и другие, главным образом, у ослабленных больных, в отде­лениях интенсивной терапии, где заражение может происходить через системы для внутрисосудистых вливаний, различные катетеры из по­лимерных соединений.

    S. saprophyticus являются частой причиной острых инфекций мочевыводящих путей у молодых женщин.

    Особое место занимают пищевые интоксикации, возникающие в результате употребления в пищу продуктов (чаще всего молочных и сладких блюд), в которых произошло размножение стафилококков и накопление энтеротоксина. Этот токсин термоустойчив, и даже после термической обработки продукты, содержащие энтеротоксин, могут вызвать пищевое отравление.

    Стафилококки могут явиться причиной токсического шока. Впер-

    вые вспышка этого синдрома возникла в США в 1983 году, у женщин, пользующихся во время менструации гигроскопичными гигиеническими тампонами. У заболевших наблюдалось повышение температуры тела, гиперемия слизистых оболочек, боли в мышцах, кожная сыпь с шелу­шением, падение кровяного давления. Заболевание возникало только при использовании тампонов, выпускаемых одной из фирм. было ус­тановлено, что случаи токсического шока возникали вследствие ряда причин: тампоны содержали карбоксиметилцеллюлозу с глюкозой и соединениями натрия, обладали сунерадсорбирующимп свойствами, поэтому чрезмерно высушивали слизистую оболочку и травмировали ее; при инфицировании стафилококками происходило их быстрое раз­множение в благоприятной среде, чему способствовало присутствие натрия в составе тампона. После запрета на продажу продукции этой фирмы вспышка прекратилась. В дальнейшем токсический шок наблю­дался у хирургических больных, особенно при использовании гигрос­копичных перевязочных материалов определенных сортов.

    Было установлено, что токсический шок вызывают стафилокок­ки, продуцирующие экзотоксин, названный токсином токсического шока (ТТШ).

    Иммунитет.Человек обладает в некоторой степени врожденной ус­тойчивостью к стафилококкам благодаря защитным свойствам кожи, фагоцитозу, наличию нормальных антител.

    После перенесенного заболевания иммунитет непродолжительный. Характерна склонность к рецидивам. Восприимчивость к стафи­лококковой инфекции возрастает при травмах, диабете, действии ионизирующих излучений.

    Стафилококковые заболевания не относятся к острозаразным, больных лечат не в клиниках инфекционных болезней, а в других отде­лениях больниц.

    Лабораторная диагностика.Материалом для исследования являют­ся гной, слизь из зева и носа, мокрота, кровь, испражнения, моча; при пищевых отравлениях - рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.

    Микроскопия мазка из исследуемого материала позволяет обна­ружить грамположительные кокки и отметить их количество. Для вы­деления чистой культуры производят посевы на элективные для стафи­лококка среды (молочно-солевой или желточно-солевой агар) и среды для стрептококка (кровяной агар). В случае, если выделена чистая куль­тура стафилококка, определяют видовую принадлежность по призна­кам: плазмокоагулаза, анаэробное сбраживание и аэробное окисле­ние глюкозы и маннита, гемолиз на кровяном агаре, наличие лецити-назы, ДНК-азы. Определяют чувствительность к антибиотикам. В це­лях эпидемиологического анализа проводят фаготипирование.

    При пищевых отравлениях определяют наличие энтеротоксина в пищевом продукте с помощью специфических антисывороток или биоп­робы на котятах.

    Профилактические и лечебные препараты.Стафилококковый ана­токсин нативный, применяется для активной иммунизации с целью ле­чения при хронических заболеваниях. Стафилококковый анатоксин очищенный адсорбированный прменяется, главным образом, для про­филактики.

    Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый содер­жит стафилококковый антитоксин, приготовлен из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. Применяется для создания пассивного иммунитета с целью лечения.

    Стафилококковый антифагин (вакцина) - для создания активного иммунитета с целью лечения.

    Стафилококковый бактериофаг жидкий. Применяется наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения.

    Стрептококки.

    Стрептококки впервые были обнаружены Т. Бильротом в 1874 г. при рожистом воспалении и Л. Пастером в 1879 г. при гнойных за­болеваниях и сепсисе. Выделены в чистой культуре Ф. Розенбахом в 1894 г.

    В медицине наиболее важное значение имеют: Streptococcus pyogenes (пиогенный стрептококк), S. pneumoniae (пневмококк), S. faecalis (энтерококк).

    Скарлатинозный стрептококк

    Возбудитель скарлатины - (3-гемолитический стрептококк любого серовара, продуцирующий эритрогенины.

    Скарлатина отличается от других стрептококковых инфекций по патогенезу и по механизму иммунитета. Заболевание протекает цик­лически. На первом этапе проявляется действие эритрогенина А (анги­на, интоксикация, мелкоточечная сыпь). На втором этапе оказывают действие сами стрептококки (гнойный лимфаденит, мастоидит, отит), так как антимикробный иммунитет мало выражен. Позже проявляется роль аллергических реакций, поэтому возможно развитие гломерулонефрита, артериитов, поражение сердца.

    Иммунитет.В отличие от других стрептококковых инфекций, пос­ле перенесенной скарлатины остается прочный антитоксический им-

    мунитет. Но антимикробный иммунитет типоспецифпчен и слабо выражен, поэтому не предохраняет переболевшего скарлатиной от дру­гих стрептококковых заболеваний.

    Менингококки

    Менингококки - Neisseria meningitidis - впервые описал Л. Вексель-баум в 1887 г.

    Морфология, культуральные, биохимические свойства.Менинго­кокки имеют бобовидную форму или вид кофейных зерен, размером 0,6-1 мкм, располагаются парами, причем вогнутые стороны обраще­ны друг к другу. Грамотрицательны (цветная вклейка рис. 30). В орга­низме образуют микрокансулу, которую утрачивают при росте на пи­тательных средах.

    На простых питательных средах не растут, их культивируют на средах с добавлением сыворотки крови. Оптимум роста 37°С. Аэро­бы. Биохимически малоактивны.

    Антигены.По капсульному антигену менингококки делятся на 8 серологических групп: А, В, С, D, X, Y, Z, W-135. Эпидемические вспыш­ки чаще связаны с менингококками группы А.

    Факторы патогенности.Менингококки не продуцируют экзоток­сина. Содержат эндотоксин в клеточной стенке. С помощью фимбрий происходит прикрепление (адгезия) менингококков к поверхности эпи­телиальных клеток.

    Устойчивость.Во внешней среде менингококки неустойчивы, по­гибают при высушивании, при 50°С гибнут в течение 5 минут, де­зинфицирующие вещества убивают их немедленно. Не переносят низ­ких температур, погибают даже при комнатной температуре, поэтому при транспортировке материал надо оберегать от охлаждения.

    Заболевание у человека.Источником инфекции является человек -больной или носитель, механизм передачи - воздушно-капельный. За­ражение происходит только при тесном и длительном общении: в ка­зарме, общежитии, школе, детском саду. Попав на слизистую оболоч­ку носоглотки, менингококки прикрепляются к клеткам эпителия, раз­множаются.

    Менингококковая инфекция проявляется у человека в разных фор­мах.

    1) Носительство - протекает бессимптомно.

    2) Назофарингит - воспаление в месте внедрения возбудителя.

    3) Эпидемический цереброспинальный менингит - гнойное воспа­ление мозговых оболочек, вызванное менингококками, проникшими из носоглотки по лимфатическим и кровеносным сосудам.

    4) Менингококцемия - в случае преодоления защитного барьера слизистых оболочек менингококки проникают в кровь, происходит массовая гибель возбудителя с освобождением эндотоксина, что при­водит к интоксикации.

    Иммунитет.Большинство людей обладают врожденным иммуните­том к менингококковой инфекции и после заражения становятся но­сителями. Стойкий иммунитет формируется и после перенесенного за­болевания, и в результате носительства.

    Лабораторная диагностикапри исследовании на носительство и при назофарингите материалом служит слизь из носоглотки, при менинги­те - спинномозговая жидкость, при менингококцемии - кровь. При об­наружении в мазках из спинномозговой жидкости грамотрицательных бобовидных диплококков, расположенных внутри лейкоцитов, выда­ют ориентировочный ответ. Выделенные чистые культуры дифферен­цируют от сходных по морфологии непатогенных нейссерий, обитаю­щих на слизистой оболочке носоглотки.

    При менингите в спинномозговой жидкости можно обнаружить ме-нингококковые антигены с помощью реакции преципитации или ИФА.

    Профилактические и лечебные препараты.Для специфической про­филактики применяют химическую вакцину из полисахаридных ан­тигенов серогрупп А и С. Для лечения применяют антибиотики (пе­нициллин, левомицетин) и сульфаниламидные препараты.

    Гонококки

    Neisseria gonorrhoeae впервые были обнаружены в 1879 г. А. Ней-ссером.

    Морфология, культуральные, биохимические свойства.Гонококки по форме сходны с менингококками, бобовидные диплококки. Гра-мотрицательны (цветная вклейка рис. 28). В патологическом материа­ле вокруг гонококков образуется слизистое капсулоподобное вещество. Спор и жгутиков гонококки не образуют.

    Гонококки чрезвычайно требовательны к питательным средам и к условиям культивирования. Питательная среда должна содержать че­ловеческий белок (сыворотку крови или асцитическую жидкость) и дол­жна быть влажной. Температура при культивировании должна быть 37°С.

    Биохимические свойства гонококков слабо выражены.

    Антигены.Антигенная структура гонококков изменчива, серо­логическое типирование не применяется.

    Факторы патогенности.Гонококки не образуют экзотоксина. При разрушении клеток выделяется эндотоксин. С помощью фимбрий осу­ществляется прикрепление (адгезия) гонококков к поверхности эпите­лиальных клеток.

    Устойчивость.Гонококки во внешней среде малоустойчивы, не пе­реносят высыхания, охлаждения, гибнут даже при комнатной тем­пературе, Чувствительны и к повышению температуры - погибают при 40°С. Но в гное, во влажной среде (полотенца, салфетки) могут сохра­няться в течение суток. Погибают в растворе азотнокислого серебра 1:10000, фенола 1%, биглюконата хлоргексидина 0,05%. Чувствитель­ны к пенициллину, тетрациклину, эритромицину, но приобретают ус­тойчивость к ним.

    Заболевания у человека.Гонококки вызывают гонорею - гнойное воспаление слизистых оболочек мочеполовых органов и бленнорею -гнойное воспаление конъюнктивы глаза. Возможна гонококковая инфекция с локализацией в прямой кишке и в зеве.

    Гонореей болеет только человек. Источник инфекции - больной человек, механизм передачи - контактный, половой, реже - непрямой контакт (через предметы). Входными воротами для гонококков служит эпителий уретры, шейки матки. Распространяясь по слизистой оболоч­ке, вызывает гнойное воспаление: острый уретрит, цервицит. У муж­чин в процесс вовлекаются семенные пузырьки, простата, у женщин, помимо матки, также маточные трубы, яичники. Могут возникнуть ос­ложнения: артрит, эндокардит, менингит, септикопиемия.

    Бленнорея новорожденных возникает при прохождении родовых путей матери, больной гонореей. Болезнь опасна: может привести к слепоте.

    Иммунитет.У человека нет врожденного иммунитета к гонорее. Перенесенное заболевание не создает невосприимчивости. Перебо

    левший гонореей может вновь заболеть в результате реинфекцин. В течение болезни образуются антитела, но они не обладают защитны­ми свойствами. Клеточный иммунитет не формируется.

    Лабораторная диагностика.Микробиологические исследования не­обходимы во всех случаях, для того, чтобы отличить гонорею от хла-мидиозов и уретритов иной этиологии. При острой гонорее лабора­торный диагноз может быть поставлен бактериоскопическим мето­дом. Для исследования у мужчин берут отделяемое уретры, у женщин -отделяемое уретры и шейки матки. Мазки из исследуемого материала окрашивают метиленовой синью и по Граму. Обнаружение бобовид­ных грамотрицательных диплококков, расположенных внутри лейкоцитов, позволяет ставить лабораторный диагноз. Однако под действием лекарственных средств и при хроническом течении болезни гонококки могут изменяться: встречаются грамположительные кокки, крупные шары, мелкие зерна. При отсутствии в мазках типичных гонококков проводится бактериологическое исследование - выделение чистой куль­туры и идентификация.

    При хронической гонорее проводят серологическую диагностику - обнаружение специфических антител с помощью РСК или РНГА.

    Профилактические и лечебные препараты.Препарата для плановой иммунизации нет. Для индивидуальной профилактики в порядке экст­ренной меры рекомендовано использовать 0,05% раствор биглюконата хлоргексидина, который выпускается во флаконах с пипеткой под на­званием "кожный дигитан". Для предупреждения бленнореи детям сра­зу после рождения на конъюнктиву глаза накапывают раствор пени­циллина, альбуцида или другого антимикробпого препарата.

    Для лечения больных гонореей применяют антибиотики, к кото­рым чувствителен гонококк. Эффективный препарат - азитромицин (сумамед).

    При хронической гонорее применяют убитую гонококковую вак­цину, которая вводится внутрикожно или внутримышечно, дозируется в млн. микробных клеток.

    Сальмонеллы

    Род Salmonella получил свое название в честь американского ученого Д. Салмона, описавшего в 1885 г. первого из представите­лей этого рода.

    К роду сальмонелл относятся: 1) возбудители брюшного тифа, паратифов А и В; 2) сальмонеллы - возбудители гастроэнтеритов (сальмонеллезов).

    Шигеллы

    Возбудителями дизентерир (шигеллеза) являются несколько видов бактерий, объединенных в род Shigella. Одного из них,впервые обна­ружил в 1891 г. русский врач А. Григорьев и изучил во время эпидемии в Японии в 1898 г. Шига. Впоследствии были выделены и описаны другие виды шигелл. По современной классификации к роду Shigella относятся 4 группы, соответственно 4 вида. Все виды, кроме S. sonnei, разделены на серовары, S. flexneri - еще на подсеровары (табл. 8).

    В последние десятилетия дизентерию чаще всего вызывают шигеллы Флекснера и Зонне, реже шигеллы Бойда. S. dysenteriae (Григорьева-Шига) в России не встречается.

    Морфология, культуральные, биохимические свойства.Шигеллы представляют собой короткие грамотрицательные палочки, они не образуют спор и капсул, в отличие от сальмонелл не имеют жгутиков.

    Факультативные анаэробы. Растут на простых питательных сре­дах, оптимум температуры 37°С, рН 6,8-7,2. По биохимическим свой­ствам различаются (табл. 5) Сбраживают глюкозу, лактозу в первые сутки не ферментируют (шигеллы Зонне - через несколько суток), ман-нит ферментируют все виды, кроме S. dysenteriae.

    Антигены.Шигеллы содержат О-антигены, некоторые серовары имеют К-антиген. Среди О-антигенов есть специфические и групповые.

    Токсинообразование.Экзотоксин, обладающий нейротропным действием, продуцируют S. dysenteriae, и этот вид вызывает заболе­вание в наиболее тяжелой форме. Все шигеллы содержат термоста­бильный эндотоксин.

    Устойчивость.Наиболее устойчивы во внешней среде S. sonnei. Ки­пячение убивает шигеллы немедленно, при 60°С они гибнут через 10-20 минут, но встречаются термоустойчивые S. sonnei, погибающие только при 70оС в течение 10 минут, то есть способные выжить при пастери­зации молока. В воде, почве, в пищевых продуктах, на предметах, в посуде шигеллы сохраняются жизнеспособными в течение одной-двух недель. S. sonnei могут размножаться в молоке. В кишечнике мух и на их лапках шигеллы выживают в течение 2-3 дней. Перелетая с нечис­тот и отбросов на пищевые продукты, мухи могут переносить возбуди­телей.

    В то же время шигеллы очень нестойки в пробах фекалий, так как погибают под влиянием микробов-антагонистов и кислой реакции сре­ды. Поэтому пробы, взятые для исследования, надо сразу же засевать на питательную среду.

    Заболевание у человека.Источником инфекции является человек -больной или носитель. Механизм передачи фекально-оральный. Зара­жение происходит через рот. Инкубационный период длится от 2 до 7 дней.

    Возбудитель проникает в клетки эпителия слизистой оболочки тол­стой кишки и размножается в них. Это приводит к воспалению (коли­ту) и образованию язв. Основные симптомы: повышение температуры тела, боли внизу живота, рвота, частый стул, в тяжелых случаях при­месь в стуле слизи и крови; характерный признак - тенезмы (ложные болезненные позывы). Болезнь длится 8-10 дней. Больные с легкими формами заболевания часто не обращаются за квалифицированной помощью, занимаясь самолечением. Недолеченная дизентерия может переходить в хроническую форму.

    Иммунитет.После перенесенного заболевания иммунитет нес­тойкий. Во время заболевания образуются антитела, обнаружение ко­торых имеет диагностическое значение.

    Лабораторная диагностика.Материалом для бактериологического исследования являются испражнения (faeces). Пробу следует брать до начала антибактериальной терапии, посев производить сразу же или помещать пробу в консервирующую жидкость (30% глицерина и 70% буферного раствора) не более, чем на один день. Для посева отбирать комочки слизи. Количество шигелл в пробе может быть очень скуд­ным, поэтому посев производится на элективную среду Плоскирева или на среду обогащения - селенитовую.

    Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологии, биохимическим свойствам и в реакции аглютинации с адсорбирован­ными видовыми сыворотками. Определяют чувствительность к антиби­отикам. Шигеллы относятся к числу бактерий, быстро приобретаю­щих устойчивость к антибиотикам, в большинстве случаев связанную с R-плазмидами. Кроме того, антигены шигелл выявляют в фекалиях с помощью ИФА.

    С целью диагностики используют серологические реакции: агг­лютинации, РИГА. Антитела появляются на второй-третьей неделе за­болевания.

    Лечебные препараты.Специфическая профилактика не разрабо­тана. В очагах заболеваемости используют дизентерийный бактерио­фаг.

    Лечение антибиотиками следует проводить с учетом чувстви­тельности к ним возбудителей. Применяют левомицетин, тетрациклин; эффективны нитрофурановые препараты, поливалентный бактериофаг. При хронической дизентерии применяют вакцинотерапию с помощью химической вакцины, вводимой через рот.

    Эшерихии

    Род Escherichia назван в честь немецкого ученого Т. Эшериха, который в 1885 г. выделил из фекалий человека и описал кишечную палочку - Escherichia coli. В этот род входят условно-патогенные кишечные палочки, являющиеся постоянными обитателями кишеч­ника человека и животных, а также патогенные для человека вари­анты, в том числе энтеропатогенные.

    Морфология, культуральные, биохимические свойства.Эшерихии представляют собой короткие толстые палочки, в препаратах распо­лагаются беспорядочно. Спор не образуют, некоторые варианты об­разуют в организме микрокапсулу. Есть варианты подвижные (перит-рихи), есть неподвижные. Грамотрицательны (цветная вклейка рис. 29).

    Факультативные анаэробы, растут на простых питательных сре­дах при рН 7,2-7,8, оптимум для роста 37°С. Штаммы Е. coli, выделенные от человека и теплокровных животных, развиваются и при 43-45°С, а кишечные палочки рыб и холоднокровных животных при такой тем­пературе не размножаются. Это различие используют для определения санитарного состояния воды, так как только обнаружение Е. coli теп­локровных свидетельствует о фекальном загрязнении.

    На дифференциально-диагностических средах Эндо, Левина, Плос-кирева кишечные палочки образуют окрашенные колонии, так как разлагают лактозу. Они обладают выраженными сахаролитически-ми свойствами: ферментируют с образованием кислоты и газа лакто­зу, глюкозу и другие углеводы (табл. 5) и протеолитическими свойс­твами - разлагают белки до индола и сероводорода. Желатин не раз­жижают. Некоторые варианты разлагают сахарозу.

    Антигены.Кишечные палочки имеют О-антиген, который является основным для установления серовара, в частности, при диагностике кишечных эшерихиозов. К-антиген - это общее обозначение всех по­верхностных антигенов, среди которых есть термолабильные и термо­стабильные. У возбудителей кишечных эшерихпозов это тер­молабильный В-антиген. Он расположен более поверхностно, чем О-антиген, поэтому для выявления О-антигена в лаборатории разрушают В-антиген путем кипячения исследуемой культуры. Н-антигены имеют­ся у подвижных вариантов кишечной палочки, при типировании не определяются. Антигенную структуру штаммов эшерихиий записывают в виде формулы, например, Е. coli О111:К58:Н12.

    Устойчивость.В воде, в почве кишечные палочки месяцами ос­таются живыми. При 60°С погибают через 15 минут, при кипячении -немедленно. Чувствительны к дезинфицирующим веществам.

    Значение Е. coli для человека.1) Кишечная палочка - представитель нормальной микрофлоры толстой кишки, приносит пользу как анта­гонист патогенных бактерий и грибов, принимает участие в синтезе витаминов. 2) Е. coli является санитарно-показательным микроорга­низмом для определения фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, оборудования пищеблоков, рук и спецодежды медицинского первсонала и т д Е coh при этом расценивается не как возбудитель заболевания, а как показатель загрязнения выделениями человека, ко­торые могут содержать возбудителей кишечных заболеваний 3) Ки­шечные палочки как условно-патогенные микроорганизмы у людей с ослабленным иммунитетом могут вызвать гнойно-воспалительные про­цессы за пределами желудочно-кишечного гракта пиелиты, циститы, холециститы У пациентов с выраженным иммунодефицитом может развиться коли-сепснс Гнойное воспаление ран, постинъекционные абсцессы могут возникнуть в результате заражения извне Кишечные палочки вызывают пищевые гоксикоинфекции при накоплении в боль­шом количестве в пищевом продукте 4) Энтеропатогенные кишечные палочки вызывают инфекционные острые кишечные заболевания -эшерихиозы Они возникают как экзогенные инфекции Источником являются больные люди или бактерионосители, механизм заражения -фекально-оральный Болеют чаще дети, главным образом в возрасте до 2 лет

    Среди возбудителей эшерихиозов различают энтеропатогенные ки­шечные палочки (ЭПКП), энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИК11), энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП), энтерогемолитические кишечные палочки (ЭГКП) (табл 6) Они различаются по антигенной структуре, по возрасту больных и по характеру заболе вания

    Энтерогемолйт ические кишечные палочки (ЭГКП), обнаруженные в последнее время, вызывают геморрагический колит и гемолитическую уремию Эти возбуди! ел и вырабатывают Шига-подобный токсин, который адсорбируется энтеральными клетками и вызывает токсине-мию Описаны вспышки тяжелопротекающих пищевых токсикоинфек-ций, вызванных Е coh 0157, среди детей Кроме того, еще выделена провизорная группа энтероадгерентных Е coh РАКП)

    Иммунтет.Устойчивость к эшсрихиозам у детей раннею возраста создается бифидум-флорои кишечника и антителами грудного мате­ринского молока После перенесенного заболевания иммунитет слабо выражен, возможны повторные случаи

    Лабораторная диагностикаоснована на выделении чистой куль­туры возбудителя и определения вида и серовара При гнойно-вос­палительных заболеваниях исследуемым материалом служат моча, желчь, гной из ран и из полости абсцесса, при сепсисе - кровь, при пищевых токсикоинфекциях - рвотные Массы, промывные воды желудка, пищевые продукты

    Выделенные чистые культуры идентифицируют по биохимическим и антигенным свойствам

    При острых кишечных инфекциях исследуют испражнения По­севы производят на дифференциально-диагностические среды, обыч­но на среду Эндо Из выросших изолированных колоний кишечной палочки отбирают те, которые агглютинируются диагностическими ОВ-сыворотками. Пересевают их на скошенный агар, выделяют чи­стую культуру и затем определяют серовар в развернутой реакции агглютинации с живой культурой (В-агглютинация) и прогретой ки­пячением культурой (О-агглютинация).

    Профилактика и лечение.Профилактика эшерихиозов - это, в пер­вую очередь, соблюдение правил личной гигиены. Это выполнение санитарно-гигиенических правил в родильных домах, молочных кух­нях, в детских садах, в стационарах, на предприятиях пищевой про­мышленности и общественного питания, постоянный надзор за ка­чеством пищевых продуктов и воды.

    Для лечения эшерихиозов применяют препараты из микробов-антагонистов: бифидумбактерин, лактобактерин. Кишечные палочки чувствительны к антибиотикам (левомицетин, тетрациклин, полимик-син), к нитрофурановым препаратам. Но эффективность лечения сни­жается из-за распространения лекарственноустойчивых эшерихий, приобретающих устойчивость путем передачи R-плазмид.

    ХОЛЕРНЫЙ ВИБРИОН

    Холерный вибрион Vibrio cholerae впервые выделил из испражнений больных и трупов погибших от холеры и изучил Р. Кох в 1882 г. в Египте. В 1906 г. Ф. Готшлих на карантинной стан­ции Эль Тор в Египте выделил из фекалий паломника вибрион, сходный с вибрионом Коха. Этиологическая роль Vibrio eltor была признана в 1962 г. по решению ВОЗ.

    Таким образом, признано существование двух биоваров: V. cholerae и V. eltor.

    Морфология, культуральные, биохимические свойства.Холерные вибрионы имеют форму тонкой изогнутой палочки, напоминающей за­пятую, длиной 2-4 мкм, грамотрицательны, не образуют спор и кап­сулы, имеют один жгутик (монотрих), очень подвижны (рис. 32).

    Очень неприхотливы к питательным средам. Хорошо растут на простых питательных средах щелочной реакции (рН 8,5-9,0), опти­мальная температура для их роста 37°С. Элективной средой для них является щелочная пептонная вода и щелочной агар. Характерной осо­бенностью холерных вибрионов является быстрый рост. Будучи аэро­бами, они в щелочной пептонной воде через 3-4 часа образуют пленку на поверхности среды. На плотной среде растут в виде прозрачных голубоватых колоний.

    Холерные вибрионы проявляют ферментативную активность: раз­жижают желатин, образуют индол, быстро расщепляют крахмал, рас­щепляют до кислоты маынозу и сахарозу, не расщепляют арабинозу (I группа Хайберга), что является тестом для дифференциации их от

    других вибрионов.

    Антигены.Вибрионы имеют О-антигены и Н-ан-тигены. Дифференциация видов проводится по О-антигену (всего их извес­тно 139). Холерные виб­рионы - Vibrio cholerae и Vibrio eltor относятся к 01. Между собой они не раз­личаются по антигенной структуре. Антиген О1 со­стоит из компонентов А,В и С. По этим компонентам холерные вибрионы делят на серовары: серовар Огава содержит компо­ненты А и В, Инаба - А и С, Гикошима - А, В и С. В 1992 г. в Мадрасе

    (Индия), а затем в других странах Азии, наблюдались массовые забо­левания холерой, вызванные холерным вибрионом, имеющим антиген не О1, а О139. Это новый вид Vibrio cholerae О139Bengal (Бенгальс­кий).

    Существуют вибрионы, сходные с холерными, по не агглютини­рующиеся О-сывороткой. Их назвали неагглютинирующиеся вибрио­ны (НАГ'и). НАГ'и выделяются от бальных диареей и от здоровых лю­дей, вызывают гастроэнтериты, которые могут сопровождаться ин­токсикацией.

    Факторы патогешюсти.Холерные вибрионы продуцируют экзо­токсин, который носит название "холероген". Под действием холерогена в тонкой кишке происходит потеря воды и ионов натрия, калия и хлора. Они обладают также способностью к адгезии. Лишены инвазивности - не проникают ни в клетки, ни в кровь.

    Устойчивость.Вибрионы чувствительны к высокой температу­ре: при 60°С погибают через 5 минут, при кипячении - немедленно. Быстро погибают при высушивании и действии света. Низкие темпе­ратуры переносят хорошо, во льду сохраняются в течение несколь­ких дней. В пищевых продуктах, воде, почве, испражнениях выжива­ют от нескольких суток до нескольких недель. Очень чувствительны вибрионы к кислотам, даже слабой концентрации. В растворе 1:10000 соляной и серной кислот они погибают в течение несколь­ких секунд. Дезинфицирующие вещества в обычных концентрациях убивают их в течение нескольких минут. Vibrio eltor, по сравнению с Vibrio cholerae, более устойчив к действию различных внешних фак­торов.

    Заболевания у человека.Холера - антропонозная инфекция. Источ­ником инфекции являются больные люди и носители. Механизм пере­дачи - фекально-оральный, чаще всего холера передается водным пу­тем, реже пищевым и контактно-бытовым. Инкубационный период при холере от нескольких часов до 5 суток.

    Попав через рот в желудок, холерные вибрионы могут погибнуть под действием кислого желудочного сока. При пониженной кис­лотности риск развития заболевания выше. Преодолев желудочный барьер, вибрионы проникают в тонкий кишечник, прикрепляются к эпителию, размножаются. Выделяющийся холероген вызывает наруше­ние водно-солевого обмена - потерю воды и солей. Клинически это про­является обильной диареей,

    Иммунитет.В течение заболевания образуются антитоксины и аптимикробные антитела. Защитную роль играют секреторные IgA, пре­пятствующие адгезии холерных вибрионов на клетках эпителия тон­кой кишки.

    Лабораторная диагностика.Материалом для исследования служат испражнения и рвотные массы, при вскрытии трупов - отрезок тонкой кишки. Исследуют также воду, пищевые продукты, а также содержи­мое кишечника здоровых людей на носительство.

    Исследования проводятся в лаборатории особо опасных инфек­ций. При взятии и пересылке необходимо соблюдать меры, обеспечи­вающие безопасность.

    Микробиологическое исследование имеет значение для лечения и должно проводиться возможно в наиболее краткие сроки. Микроско­пия мазка из исследуемого материала носит предварительный харак­тер. Первый ориентировочный ответ можно получить при постановке РИФ.

    Через 5-6 часов в посевах на жидких питательных средах исс­ледуют пленку на поверхности среды, определяют морфологию, под­вижность, ставят реакцию агглютинации со специфической сыворот­кой. Выдают первый предварительный ответ.

    Через 10-12 часов изучают колония на плотных питательных сре­дах, выдают второй предварительный ответ.

    Окончательный ответ выдается после выделения и изучения чи­стой культуры. Идентификацию культуры проводят на основании морфологии, подвижности, агглютинации специфическими сыворотками, изучения биохимических свойств. Для дифференциа­ции Vibrio eltor от Vibrio cholerae используется его способность рас­ти в питательной среде с полимиксином, агглютинировать куриные эритроциты, лизирфваться специфическим бактериофагом.

    Профилактические и лечебные препараты.Для лечения наиболее важным является восполнение дефицита воды и электролитов с по­мощью солевых растворов. Применение тетрациклина дополняет лечение и позволяет уменьшить объем вводимых солевых раство­ров. Для специфической профилактики существуют вакцины: 1)кор-пускулярная убитая; 2)холероген-анатоксин; 3)ассоциированная вакцина (холероген-анатоксин + О-антиген).

    Клостридии столбняка


    Рекомендуемые страницы:

    PPT - Выделение и идентификация пиогенных кокков PowerPoint Presentation

  • Выделение и идентификация пиогенных кокков Второй эксперимент

  • Цель эксперимента • Освоить первичный принцип и метод выделения и идентификации пиогенных кокков из клинических образцов. • Чтобы диагностировать клиническое заболевание и направлять нас по использованию лекарств.

  • Мазки Колониальные характеристики колониальная Гемолитическая реакция Изоляция Наблюдение морфологии культуры Пигментация (чашки с кровяным агаром) Наблюдение за окрашиванием по Граму с помощью микроскопа Направление Идентификация Чистая культура Тест на чувствительность к антибиотикам ПРОЦЕДУРА Морфологические характеристики (окраска по Граму) (Микроскопическое исследование) Типичные образцы колоний

  • Метод идентификации STAPHYLOCOCCI • Окрашивание по Граму • Выделение и культивирование • Чистая культура • Направленная идентификация • Тест на чувствительность к антибиотикам

  • Окрашивание по Граму • Морфологические характеристики - Типичные сферические скопления стафилококков , которые как гроздья винограда.• Ячейка имеет диаметр около 1 мкм. • Типичные клетки грамположительны, неподвижны и не образуют спор.

  • Стафилококки - это грамположительные кокки, обычно расположенные в кластеры по или похожие на виноград.

  • Изоляция и культивирование • Культивирование • Образцы, посаженные на чашки с кровяным агаром, образуют типичные колонии за 18 часов при 370C • Гемолиз и образование пигмента могут произойти только через несколько дней и являются оптимальными при комнатной температуре.

  • Выделение и культивирование • характеристики колоний • Колонии стафилококков на твердых мейдах круглые, гладкие, приподнятые и блестящие. S.aureus образует колонии от серых до темно-золотисто-желтых. • Колонии S.epidermidis при первичной изоляции имеют серый или белый цвет. • Различная степень гемолиза вызывается S.auerus, а иногда и другими видами.

  • Чистая культура • МАТЕРИАЛЫ: • Культура на склоне агара • Колонии на чашке с агаром • ПРОЦЕДУРА • С помощью стерилизованной пламенем проволочной петли для посева перенесите небольшое количество бактерий из колонии на чашку с агаром.Затем нанесите штрих на склоне агара. • Стерилизуйте горловину пробирок, снова заткните пробирки и подожгите петлю. • Промаркируйте и инкубируйте при 37 ℃ в течение 18-24 часов •.

  • Направленная идентификация • Тест на коагулазу • Тест на ДНК • Тест на ферментацию маннита. • Тест на фаговое типирование • Эксперимент на животных

  • Тест на коагулазу • Наличие фермента коагулазы, коагулазная плазма плазмы является почти исключительным свойством Staph.aureus.Есть два способа выполнения этого теста: • Тест на коагулазу на слайдах • Тест на коагулазу в пробирке

  • Тест на коагулазу • Коагулаза - это фермент, превращающий фибриноген в фибрин, способствующий свертыванию крови. Было высказано предположение, что этот фермент может быть фактором вирулентности, поскольку свернувшаяся кровь вокруг бактерий защищает их от иммунной системы. • Однако коагулазо-отрицательные штаммы часто столь же патогенны, как и коагулазо-положительные штаммы.

  • Скользящий тест на коагулазу

  • Пробирочный тест на коагулазу Коагулаза в левой трубке Положительный Коагулаза в правой трубке отрицательный

  • Тест на ДНК • Засейте чашки с ДНК-агаром, чтобы образовались петли для роста. в бляшках диаметром около 1 см.Инкубируйте при 370 ° C в течение ночи. Залейте планшет 1 н. Соляной кислотой. Очистка вокруг колоний указывает на активность ДНКазы. Соляная кислота реагирует с неизмененной дезоксирибонуклеиновой кислотой с образованием мутного осадка. Некоторые другие бактерии, например. Serratia, может дать положительную реакцию.

  • Тест ферментации маннита. • Засейте бактерии в микропробирку с маннитом, инкубируйте при 37 ° C в течение 18 ч. Saureus ферментирует маннит с образованием кислоты, которая вызывает пожелтение среды.

  • Тест на фаговое типирование • Этот тест используется для отслеживания возбудителя инфекции в эпидемиологии, если это необходимо. Обычно он не проводится в обычных клинических целях.

  • Эксперимент на животных Выделение и идентификация бактерий Остатки рвоты Фильтр для наблюдения за продуктами питания Среда для мясного супа 6-8 Вт инъекция пищевого отравления для кошек

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Этот тест полезен для лечения S .aureus инфекция. • материалы • S.aureus (выделенный из гноя пациента). • Несколько видов фильтровальной бумаги (каждый содержит разные виды антибиотиков) • Пластина с питательным агаром

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Посевы S.aureus на чашку с агаром (тщательно накрывают чашку) • ПРОЦЕДУРА • Поместите 4 вида бумага содержала разные антибиотики на планшете (расстояние между каждой бумагой около 2 см) • Инкубируйте при 370C 18-24 часа. • Наблюдайте за результатами исследования планшетов на предмет наличия зон подавления роста бактерий вокруг фильтровальной бумаги.На чувствительность организма указывает диаметр зоны задержки роста.

  • Димидиация энтеробактерий в соответствии с ферментацией лактозы • Ферментеры лактазы: сапрофитные и комменсальные Escherichia Klebsiella Citrobater Enterobacter Enterobacter, • Нелактазные ферментеры: патогены, возбудители Salmonella

    000, Salmonella Shigella some 9128 и т. д. Вид стыкового наклона h3S Подвижность E.coli AG AG - + Salmonella A - +/- + Other Salmonella AG - +/- + Shigella A - +/- - стык: фермент декстроза наклон: лактоза • A: кислота AG: кислота и газ

  • Процедура Наблюдение за колониальными характеристиками Выделение образцов Окрашивание по Граму (пластина SS / EMB) Серологическая идентификация TSI Биохимическая реакция

  • Образцы • Следует брать разные образцы в зависимости от вида и процесса заболевания.кровь костный мозг Стул мочи

  • Изоляция • Питательная среда: агар SS • Метод: штриховая пластина • Результат: непатогенетические колонии: средний размер, красный Подозреваемые колонии: бесцветные, маленькие, непрозрачные

  • Escherichia coli

  • Shigella sonnei

  • Salmonella

  • Vibrio cholerae

  • .

    PPT - Выделение и идентификация пиогенных кокков PowerPoint Presentation

  • Эксперимент 3 Выделение и идентификация пиогенных кокков

  • Цель эксперимента • Освоить основной принцип и метод, которые используются для выделения и идентификации клинических образцов пиогенных кокков . • Чтобы диагностировать клиническое заболевание и направлять врачей в выборе подходящих лекарств.

  • Колониальные характеристики колониальные Морфологические наблюдения гемолитической реакции Пигментация ПРОЦЕДУРА Мазки Морфологические характеристики (окраска по Граму) (Микроскопическое исследование) Образцы Выделение культуры (пластина кровяного агара) окрашивается и наблюдают за типичными колониями Направление Чистая культура Тест на чувствительность к антибиотикам Идентифицированный метод определения стафилококков • Окрашивание по Граму • Выделение и культивирование • Чистая культура • Направленная идентификация

  • Стафилококки - это грамположительные кокки, обычно расположенные в скоплениях или кластерах, похожих на виноградные

  • Направление • тест ферментации маннита.• Тест на коагулазу • Тест на ДНК • Тест на фаговое типирование • Эксперимент на животных

  • Тест на ферментацию маннита. • Засейте бактерии в микропробирку с маннитом, инкубируйте при 37 ° C в течение 18 ч. Saureus ферментирует маннит с образованием кислоты, которая вызывает пожелтение среды.

  • Тест микробиологического эксперимента • Если пациент инфицирован патогенными энтеробактериями (сальмонеллами), как диагностировать микробиологические методы в лаборатории? (простая процедура) • Когда пациент инфицирован гноеродными кокками, как диагностировать микробиологические методы в лаборатории? (простая процедура) • Когда пациент заражен вирусом гриппа, как диагностировать микробиологические методы в лаборатории? (простая процедура)

  • Тест на коагулазу • Коагулаза - это фермент, превращающий фибриноген в фибрин, способствующий свертыванию крови.• Это может быть фактор вирулентности, поскольку свернувшаяся кровь вокруг бактерий защищает их от иммунной системы. • Коагулазо-отрицательные штаммы часто столь же патогенны, как и коагулаз-положительные штаммы.

  • Тест на коагулазу на слайдах

  • Тест на коагулазу в трубке Коагулаза в левой трубке Положительный Коагулаза в правой трубке отрицательный

  • Тест на ДНК • Засейте чашки с ДНК-агаром, чтобы образовались петли для роста. в бляшках диаметром около 1 см.Инкубируйте при 370 ° C в течение ночи. Залейте планшет 1 н. Соляной кислотой. Очистка вокруг колоний указывает на активность ДНКазы. Соляная кислота реагирует с неизмененной дезоксирибонуклеиновой кислотой с образованием мутного осадка. Некоторые другие бактерии, например. Serratia, может дать положительную реакцию.

  • Тест фагового типа • Этот тест используется для отслеживания инфекционного агента в эпидемиологии, если это необходимо. • Обычно это не делается для обычных клинических целей.

  • Эксперимент на животных Рвотные экскременты, остатки пищи Среда для мясного супа Выделение и идентификация бактерий с фильтром инъекция 6-8 недель наблюдение за кошкой Пищевое отравление

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Этот тест полезен для лечения S.aureus инфекция. • материалы • Staphaureus (выделенный из гноя пациента). • Несколько видов фильтровальной бумаги (каждый содержит разные виды антибиотиков) • Пластина с питательным агаром

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Штрихи стафауреуса на чашке с агаром • (тщательно покрывают чашку) антибиотики • на планшете (расстояние между каждой бумагой около 2 см) • инкубируйте при 370 ° C в течение 18-24 часов. • Наблюдайте за результатами на пластинах • Чувствительность организма обозначается диаметром • зоны задержки роста.

  • Лабораторная диагностика патогенных энтеробактериальных инфекций

  • Димидиация энтеробактерий в соответствии с ферментацией лактозы • Ферментеры лактазы: сапрофитные и комменсальные Citactobacterium Escherichia somebacterobacteris, Salactobacter, Salactobacter, Salactobacter, Citactobacter, Citactobacter, Citactobacter, Citactobacter, Citactobacter, Citactobacter. Serratia

  • Процедура Наблюдение за колониальными характеристиками Выделение образцов Окрашивание по Граму (пластина SS / EMB) Серологическая идентификация TSI Биохимическая реакция

  • Образцы • В зависимости от вида и вида необходимо брать разные образцы е процесс болезни.кровь костный мозг Стул мочи

  • Изоляция • Питательная среда: агар SS • Метод: штриховая пластина • Результат: Патогенетические колонии: среднего размера, красные Подозрительные колонии: бесцветные, маленькие, непрозрачные

  • Биохимические реакции сальмонелл и т. д. Вид снизу, наклон h3S, подвижность E.coli AG AG - + Salmonella A - +/- + Other Salmonella AG - +/- + Shigella A - +/- - снизу: фермент, декстроза, наклон: лактоза A: кислота AG: кислота и газ

  • Антигены сальмонелл • О-антиген полисахарид соматического антигена ЛПС, используемый для разделения сальмонелл на 42 группы Группы AZ являются патогенами, устойчивыми к нагреванию (сохраняет активность при 100 ℃) H-антиген, антиген жгутиков, делят фазу Salmonella: специальный нет специального антигена Vi, связанного с вирулентностью Salmonella, чувствительной к нагреванию (теряет активность при 60 ℃)

  • Salmonella

  • Серологическая идентификация сальмонелл Выберите образец Реагировать с поливалентной антисывороткой AZ Реакция агглютинации (+) (-) Реагировать с несколькими отдельными типами антисыворотки против O и анти-H. Реагировать с антисывороткой против Vi. Определите ее группу. и фаг

  • Окрашивание по Граму

  • Окрашивание по Граму Nocardia asteroides кислотостойкое окрашивание Nocardia asteroides

  • 90 004 жгутика

  • .

    PPT - Выделение и идентификация пиогенных кокков PowerPoint Presentation

  • Выделение и идентификация пиогенных кокков Второй эксперимент

  • Цель эксперимента • Освоить первичный принцип и метод выделения и идентификации пиогенных кокков из клинических образцов. • Чтобы диагностировать клиническое заболевание и направлять нас по использованию лекарств.

  • Мазки Колониальные характеристики колониальная Гемолитическая реакция Изоляция Наблюдение морфологии культуры Пигментация (чашки с кровяным агаром) Наблюдение за окрашиванием по Граму с помощью микроскопа Направление Идентификация Чистая культура Тест на чувствительность к антибиотикам ПРОЦЕДУРА Морфологические характеристики (окраска по Граму) (Микроскопическое исследование) Типичные образцы колоний

  • Метод идентификации STAPHYLOCOCCI • Окрашивание по Граму • Выделение и культивирование • Чистая культура • Направленная идентификация • Тест на чувствительность к антибиотикам

  • Окрашивание по Граму • Морфологические характеристики - Типичные сферические скопления стафилококков , которые как гроздья винограда.• Ячейка имеет диаметр около 1 мкм. • Типичные клетки грамположительны, неподвижны и не образуют спор.

  • Стафилококки - это грамположительные кокки, обычно расположенные в кластеры по или похожие на виноград.

  • Изоляция и культивирование • Культивирование • Образцы, посаженные на чашки с кровяным агаром, образуют типичные колонии за 18 часов при 370C • Гемолиз и образование пигмента могут произойти только через несколько дней и являются оптимальными при комнатной температуре.

  • Выделение и культивирование • характеристики колоний • Колонии стафилококков на твердых мейдах круглые, гладкие, приподнятые и блестящие. S.aureus образует колонии от серых до темно-золотисто-желтых. • Колонии S.epidermidis при первичной изоляции имеют серый или белый цвет. • Различная степень гемолиза вызывается S.auerus, а иногда и другими видами.

  • Чистая культура • МАТЕРИАЛЫ: • Культура на склоне агара • Колонии на чашке с агаром • ПРОЦЕДУРА • С помощью стерилизованной пламенем проволочной петли для посева перенесите небольшое количество бактерий из колонии на чашку с агаром.Затем нанесите штрих на склоне агара. • Стерилизуйте горловину пробирок, снова заткните пробирки и подожгите петлю. • Промаркируйте и инкубируйте при 37 ℃ в течение 18-24 часов •.

  • Направленная идентификация • Тест на коагулазу • Тест на ДНК • Тест на ферментацию маннита. • Тест на фаговое типирование • Эксперимент на животных

  • Тест на коагулазу • Наличие фермента коагулазы, коагулазная плазма плазмы является почти исключительным свойством Staph.aureus.Есть два способа выполнения этого теста: • Тест на коагулазу на слайдах • Тест на коагулазу в пробирке

  • Тест на коагулазу • Коагулаза - это фермент, превращающий фибриноген в фибрин, способствующий свертыванию крови. Было высказано предположение, что этот фермент может быть фактором вирулентности, поскольку свернувшаяся кровь вокруг бактерий защищает их от иммунной системы. • Однако коагулазо-отрицательные штаммы часто столь же патогенны, как и коагулазо-положительные штаммы.

  • Скользящий тест на коагулазу

  • Пробирочный тест на коагулазу Коагулаза в левой трубке Положительный Коагулаза в правой трубке отрицательный

  • Тест на ДНК • Засейте чашки с ДНК-агаром, чтобы образовались петли для роста. в бляшках диаметром около 1 см.Инкубируйте при 370 ° C в течение ночи. Залейте планшет 1 н. Соляной кислотой. Очистка вокруг колоний указывает на активность ДНКазы. Соляная кислота реагирует с неизмененной дезоксирибонуклеиновой кислотой с образованием мутного осадка. Некоторые другие бактерии, например. Serratia, может дать положительную реакцию.

  • Тест ферментации маннита. • Засейте бактерии в микропробирку с маннитом, инкубируйте при 37 ° C в течение 18 ч. Saureus ферментирует маннит с образованием кислоты, которая вызывает пожелтение среды.

  • Тест на фаговое типирование • Этот тест используется для отслеживания возбудителя инфекции в эпидемиологии, если это необходимо. Обычно он не проводится в обычных клинических целях.

  • Эксперимент на животных Выделение и идентификация бактерий Остатки рвоты Фильтр для наблюдения за продуктами питания Среда для мясного супа 6-8 Вт инъекция пищевого отравления для кошек

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Этот тест полезен для лечения S .aureus инфекция. • материалы • S.aureus (выделенный из гноя пациента). • Несколько видов фильтровальной бумаги (каждый содержит разные виды антибиотиков) • Пластина с питательным агаром

  • Тест на чувствительность к антибиотикам • Посевы S.aureus на чашку с агаром (тщательно накрывают чашку) • ПРОЦЕДУРА • Поместите 4 вида бумага содержала разные антибиотики на планшете (расстояние между каждой бумагой около 2 см) • Инкубируйте при 370C 18-24 часа. • Наблюдайте за результатами исследования планшетов на предмет наличия зон подавления роста бактерий вокруг фильтровальной бумаги.На чувствительность организма указывает диаметр зоны задержки роста.

  • Димидиация энтеробактерий в соответствии с ферментацией лактозы • Ферментеры лактазы: сапрофитные и комменсальные Escherichia Klebsiella Citrobater Enterobacter Enterobacter, • Нелактазные ферментеры: патогены, возбудители Salmonella

    000, Salmonella Shigella some 9128 и т. д. Вид стыкового наклона h3S Подвижность E.coli AG AG - + Salmonella A - +/- + Other Salmonella AG - +/- + Shigella A - +/- - стык: фермент декстроза наклон: лактоза • A: кислота AG: кислота и газ

  • Процедура Наблюдение за колониальными характеристиками Выделение образцов Окрашивание по Граму (пластина SS / EMB) Серологическая идентификация TSI Биохимическая реакция

  • Образцы • Следует брать разные образцы в зависимости от вида и процесса заболевания.кровь костный мозг Стул мочи

  • Изоляция • Питательная среда: агар SS • Метод: штриховая пластина • Результат: непатогенетические колонии: средний размер, красный Подозреваемые колонии: бесцветные, маленькие, непрозрачные

  • Escherichia coli

  • Shigella sonnei

  • Salmonella

  • Vibrio cholerae

  • .

    чистых культур и нанесение штрихов: выделение отдельных бактериальных колоний из смешанного образца

    На чашке Петри, если одна бактерия проходит несколько циклов бесполого размножения, это приведет к образованию клональной колонии. Однако получение одной бактерии из смешанного образца, такого как почвенная суспензия, может быть трудным. Если взять одну петлю этой гетерогенной культуры, она может содержать до триллиона отдельных бактерий. Чтобы распространить такое количество бактерий на поверхность чашки с агаром и получить одну колонию, даже используя зигзагообразный узор, петлю нужно было бы непрерывно протягивать по поверхности достаточного количества чашек, установленных бок о бок, чтобы охватить целостность Острова Свободы.Очевидно, что ученые не используют столько пластин. Вместо этого они используют технику, называемую нанесением штрихов.

    Методика планшетов основана на постепенном разбавлении бактериального образца и выполняется на твердой поверхности среды одной чашки Петри. Для начала поверхность медиа визуально разделена на пять частей, при этом четыре фрагмента окружности назначены первыми четырьмя участками, а центр пластины - пятым. В результате из одной чашки Петри будет создано пять чашек с питанием.Затем, используя полную петлю желаемого посевного материала, на первом участке наносится зигзагообразный узор. Затем либо используется новая одноразовая петля, либо, в случае проволочной петли, ее стерилизуют с помощью горелки Бунзена, обжигая ее до докрасна по всей длине проволоки. Это использование новой петли или петли для стерилизации пламенем удаляет все оставшиеся бактериальные клетки, способствуя их разведению. Затем горячую петлю охлаждают на воздухе в течение нескольких секунд, прежде чем протащить через первую секцию, чтобы создать три-четыре отдельных линии, каждая из которых несет только часть бактерий во вторую секцию.Остальные секции наносятся таким же образом, используя каждый раз стерильную петлю и однократно проходя через предыдущую полосу.

    При использовании этого цикла штриховки и стерилизации концентрация бактерий в каждой последующей секции должна быть снижена так, чтобы последняя секция содержала только несколько дискретно расположенных бактерий. После инкубации эти отдельные бактерии размножаются с образованием изолированных клональных колоний дочерних клеток, которые называются колониеобразующими единицами или КОЕ.Их можно собрать и повторно посеять, чтобы гарантировать, что в последующей работе будет задействован только один тип бактерий, называемый чистой культурой. Помимо выделения отдельных колоний из смешанной бактериальной культуры, метод посева штрихов также используется для отбора штаммов, специфичных для среды, определения морфологии бактериальных колоний или идентификации различных видов бактерий. В этом видео мы продемонстрируем, как выделить колонии отдельных бактерий из суспензии смешанных бактерий с помощью метода посева полос.

    Для начала наденьте лабораторные перчатки и лабораторный халат. Затем простерилизуйте рабочее пространство, используя 70% этанол. Затем выберите подходящую среду, которая будет поддерживать используемые виды или штамм бактерий, и начните подготовку среды. Здесь обычный агар LB готовят путем отвешивания десяти граммов предварительно приготовленных порошкообразных сред и 7,5 граммов агара. Добавьте взвешенные высушенные компоненты в стеклянную бутыль, которая вмещает вдвое больший конечный объем, чтобы избежать переполнения. Затем налейте в бутылку 500 миллилитров воды и плотно закройте ее.Стерилизуйте среду, поместив бутылку в автоклав с температурой 121 градус Цельсия на двадцать минут. После завершения используйте термостойкие перчатки или подставку под горячее, чтобы удалить носитель из машины, а затем немедленно закрутите крышку бутылки, чтобы плотно закрыть ее.

    Для использования в тот же день дайте носителю остыть, поместив бутылку в водяную баню, нагретую до примерно 45 градусов Цельсия, чтобы сохранить носитель в жидком состоянии. В качестве альтернативы носитель можно оставить при комнатной температуре для хранения в твердом состоянии.При необходимости поместите бутылку в микроволновую печь со слегка приоткрытой крышкой, чтобы среда расплавилась, и дайте ей остыть на водяной бане с температурой 45 градусов Цельсия.

    Затем возьмите упаковку стерильных чашек Петри и с помощью перманентного маркера пометьте их именем исследователя и носителя, а также датой. Затем перенесите требуемый объем среды в стерильный сосуд и при необходимости добавьте антибиотики или другие чувствительные компоненты. Здесь 50 миллилитров среды смешивают со 100 микролитрами канамицина до конечной концентрации 25 микрограммов на миллилитр.Вращайте трубку, чтобы обеспечить равномерное распределение добавленных компонентов в среде. Медленно, чтобы избежать образования пузырьков, налейте от 20 до 25 миллилитров культуральной среды приблизительно 45 градусов Цельсия в каждую из чашек. Если появляются пузырьки или пена, быстро удалите их с помощью обычной пипетки и стерильного наконечника. Затем немедленно закройте все крышки, чтобы предотвратить загрязнение. Дайте агару затвердеть при комнатной температуре не менее двух часов или на ночь. После застывания храните планшеты для культивирования в перевернутом виде при температуре 4 градуса Цельсия, чтобы минимизировать конденсацию на поверхности среды.

    Для посева выбранной культуры сначала возьмите чистую культуральную чашку и снимите крышку. Быстро погрузите одноразовую стерильную петлю в желаемый посевной материал, а затем сразу же зигзагообразным движением протрите петлю по первому квадранту планшета. Закройте чашку крышкой, выбросьте использованную петлю для посева, а затем выберите новую стерильную петлю. Используя новую петлю, сделайте от трех до четырех штрихов, пересекающих исходную линию мазка, исходящую из первого квадранта, которая должна содержать относительно плотную популяцию бактерий во втором квадранте.Закройте крышку еще раз и выбросьте петлю. С новой петлей повторите это действие снова, но на этот раз переходя из второго квадранта в третий. Затем снова с новой петлей сделайте еще одну полоску с третьей на четвертую часть пластины. Наконец, с новой петлей сделайте последний штрих зигзагообразным узором от четвертого квадранта к центру пластины. Распространенность бактерий в этой области будет ниже, что в идеале позволит создать отдельные колонии из одной жизнеспособной материнской клетки.

    Установите крышку планшета на место и, если это возможно для бактерий, закройте планшет парафиновой пленкой для предотвращения попадания воздуха. Переверните культуральную чашку вверх дном, чтобы избежать капель конденсата, а затем поместите при температуре, подходящей для роста. Здесь инкубатор настроен на 37 градусов Цельсия. Дайте планшету инкубироваться, пока не станут видны колонии бактерий. Чтобы создать клональную бактериальную популяцию, выберите одну отдельную колонию из этой чашки. Теперь с помощью стерильной петли коснитесь целевой колонии и, как и раньше, сделайте полосу в первом квадранте новой чашки.Продолжайте поочередно стерилизовать петлю и штриховать оставшиеся квадранты пластины, как показано ранее, заканчивая зигзагом к центру. Закройте чашку и поместите ее для инкубации до образования отдельных колоний. После выращивания этих колоний они обычно представляют собой чистые клональные штаммы.

    Исходная пластина для штриховки может содержать колонии, происходящие из клеток разных видов бактерий или клеток с разным генетическим составом, в зависимости от чистоты образца.Посредством последующего выделения одной колонии, где все единицы получены из общей материнской клетки, вторая процедура штриховки генерирует относительно клональную бактериальную популяцию, подходящую для дальнейшей характеристики или инокуляции в бульон.

    .

    Смотрите также