• Главная » Разное » Выделение и отделение последа

    Выделение и отделение последа


    Признаки и способы отделения плаценты (последа)

    Что такое послед или детское место? Это плацента, мембрана и пуповина, то есть плацента со всеми своими оболочками и пуповиной. Послед играет очень важную роль в развитии эмбриона. Он выполняет следующие функции:

    • Защитную. Защищает плод от кровяных антител матери и одновременно не дает антителам плода проникнуть в кровь матери. По сути, он не допускает иммунологический конфликт между организмом матери и ребенка. К тому же, он не пропускает некоторые лекарственные средства, которые может принимать мать, или же бактерии во время простудных заболеваний женщины.
    • Эндокринную. Продуцирует биологически активные вещества, а также гормоны, которые необходимы для развития эмбриона.
    • Газообменную. Транспортирует кислород из крови матери, в то время как углекислый газ выводит наружу.
    • Питательную. Обеспечивает питание эмбриона необходимыми для развития веществами.

    Послед – это эмбриональный орган, который образовывается и существует только во время беременности. После родов он должен отделиться с помощью сокращений матки и брюшного пресса, а затем выйти естественным путем. Но иногда этого не происходит. Это зависит от многих причин, например от слабых мышц пресса или различных патологий.

    Когда происходит отделение последа

    После рождения малыша происходит отделение плаценты, которая во время всей беременности была прикреплена к стенке матки. Этот естественный физиологический процесс должен протекать самостоятельно и начинаться сразу же после родов.

    Сами роды делятся на три основные части. Это схватки, рождение младенца и рождение детского места. Этот процесс должен протекать не более, чем 30 минут, в это время происходит несколько безболезненных схваток и осуществляется полное опорожнение матки за счет выхода последа. Отсюда и происходит название этого эмбрионального органа, ведь он покидает матку последним. После выхода послед исследуют на наличие патологий и оборванных сосудов. Иногда его могут отдать на гистологический анализ.

    Признаки

    Существует несколько основных признаков отделения детского места:

    • Признак Шредера. Он заключается в том, что меняется состояние, высота и форма матки. Она становится более плоской, ее дно приподнимается, а сам орган отклоняется в правую сторону.
    • Признак Альфреда. Он заключается в том, что свободный конец пупочного каната заметно удлиняется. После родов перерезанный пупочный канат захватывают зажимом, а после того как происходит отделение, а соответственно и опущение плаценты, удлиняется и сам канат.
    • Признак Микулича. Он заключается в том, что роженица чувствует схватки, то есть позыв к потугам. Но этот признак проявляется не у всех женщин.
    • Признак Клейна. Он заключается в том, что во время потуг длина пупочного каната не изменяется, соответственно детское место не прикреплено к стенке матки, а уже отделилось и лежит свободно без какого-либо крепления.
    • Признак Ключтера-Чукалова. Он заключается в том, что при нажатии на надлобковый участок, видимая часть пупочного каната удлиняется, а после нажатия пуповина остается неподвижной.

    Методы отделения

    Существует несколько методов наружной стимуляции отделения детского места:

    • Метод Абуладзе. Манипуляции должны начинаться с опустошения мочевого пузыря. Затем нужно сделать мягкий массаж матки. Затем захватить брюшную стенку за продольную складку. При этом расхождение между мышцами должно устранится, а размер живота уменьшиться. Далее роженица должна сильно потужиться. Этот способ достаточно эффективный и безболезненный.

    • Метод Гентера. В этом случае послед, как бы, выдавливают. Вначале нужно опустошить мочевой пузырь. Затем врач-гинеколог нажимает руками, сложенными в кулаки на живот роженицы, тем самым выживая плаценту. Этот способ довольно травмоопасный, поэтому очень важен опыт доктора и большая осторожность при проведении этой манипуляции.
    • Метод Креде-Лазаревича. Как правило, он применяется, если другие методы были неэффективны. Вначале производится опустошение мочевого пузыря, а затем массаж матки. Далее врач кладет руку на дно этого органа так, чтобы один палец упирался в переднюю стенку, а четыре пальца в заднюю стенку. В процессе этих манипуляций доктор сжимает матку, надавливает на нее и таким образом выталкивает плаценту.

    Если предыдущие методы не помогли, производится ручное отделение последа.

    Оно практикуется только тогда, когда невозможно выполнить его другим способом и при сильном кровотечении, когда на счету каждая минута. Эта процедура должна проходить с соблюдением всех мер безопасности и антисептики. Врач-гинеколог должен обработать руки до локтя и надеть стерильные перчатки. Затем обработать антисептическим раствором половые губы, лоно и внутреннюю поверхность бедер пациентки. Накрыть живот женщины стерильной пеленкой и только после этого приступить к процедуре.

    Она производится либо под наркозом, либо с помощью обезболивающих препаратов. Врач вводит одну руку в полость матки, другой рукой он сверху надавливает на брюшную стенку. При обнаружении места крепления эмбрионального органа к матке, доктор отделяет ее пилообразными движениями. Отделившийся эмбриональный орган нужно достать левой рукой, правая же рука должна остаться в матке, чтобы врач смог осмотреть ее на наличие патологий и повреждений. А также для того, чтобы убедиться, что в ней не осталось частей последа.

    Не нужно путать ручное отделение плаценты и ручное выделение последа. Это разные манипуляции. К тому же отделение, это довольно сложный процесс, в то время, как выведение уже отделившегося последа не представляет большой угрозы для здоровья матери.

    Патологии

    Сейчас мы попробуем разобраться, почему вовремя не происходит процесс отделения такого органа как детское место и какие патологии способствуют этой задержке.

    • Гипотоническое состояние маточной мускулатуры может стать причиной задержки последа.
    • Иногда причиной может стать ненормальное расположение, то есть низкое прикрепление плаценты.
    • Предлежание – это процесс, при котором плацента снижается в нижний сегмент матки.
    • Приращение – это процесс слишком сильного прикрепления плаценты.
    • Плотное прикрепление такого органа, как детское место отличается от приращения только тем, что интенсивность прикрепления немного слабее.
    • Отслойка – это патология, при которой происходит преждевременное отхождение плаценты. В этом случае может произойти кровотечение, которое опасно не только для матери, но и для ребенка.
    • Преждевременное созревание или старение плаценты может свидетельствовать о серьезных проблемах и возможном прерывании беременности.
    • Позднее созревание чаще всего проявляется у женщин с сахарным диабетом и у курящих беременных. Это указывает на необходимость вести здоровый образ жизни.

    Видео: как происходит отделение плаценты

    Рекомендуем к просмотру. В этом видео врач-гинеколог при помощи муляжа, наглядно покажет, как происходит ручное отделение такого эмбрионального органа, как плацента.

    Интересные темы для беременных

    Хочу попросить женщин, которые сталкивались с проблемой отделения детского места, описать в своих комментариях, как вам помогали акушерки. Знали ли вы до родов, что могут возникнуть какие-то проблемы и были ли у вас описанные в статье патологии.

    стволовых клеток плаценты / клеток-предшественников: выделение и характеристика


    2.1.1 Выделение

    Для выделения hAEC разработаны различные протоколы. Текущие исследования направлены на разработку протоколов изоляции для введения чАЭК в клиниках с терапевтической целью [ 12 - 14 ].
    Выделение hAEC начинается с отслаивания амниотической мембраны от подлежащей хориональной мембраны с последующим обширным промыванием в соответствующем буфере [ 12 , 15 - 17 ] и последующим разрезанием мембраны на мелкие кусочки.Этап промывки имеет решающее значение, так как остаточные сгустки крови имеют тенденцию снижать эффективность переваривания трипсина. Основа для выделения включает серию перевариваний трипсином для высвобождения чАЕС, фильтрацию с использованием фильтров с разным размером пор (70–100 мкм), центрифугирование и последующее суспендирование в соответствующей среде, лучше всего подходящей для культивирования прилипших эпителиальных клеток. Наиболее часто применяемый протокол заключается в трехкратной обработке кусочков амниона трипсином (0,05%) с интервалами инкубации продолжительностью 10-40 минут, с полученным выходом 80–300 × 10 6 чАЭК из однократной плаценты [ 18 ].
    Различные факторы, такие как концентрация трипсина, продолжительность инкубации, а также свежесть плаценты, влияют на выход и жизнеспособность чАЕС после выделения [ 17 , 19 ]. Сообщалось также об однократной 30-минутной инкубации в трипсине, подчеркивая, что сокращение времени инкубации снижает вероятность причинения клеточного повреждения из-за воздействия ферментов, сохраняя большую жизнеспособность клеток [ 17 ]. Таким образом, попытки улучшить протокол выделения и добиться лучшего выхода привели к модификации концентраций трипсина (в диапазоне 0.05–2,5%) в зависимости от того, какие инкубационные периоды также стандартизированы [ 16 , 17 , 19 - 22 ]. В качестве альтернативы этим процедурам выделения также сообщалось о выделении hAEC после удаления hAMSC из амниона [ 23 , 24 ]. Это достигается либо вручную соскабливанием амниотической мезодермы без воздействия на эпителиальный слой [ 17 ], либо ферментативным удалением hAMSC, после чего оставшаяся ткань подвергается расщеплению трипсином [ 23 ].Кроме того, было описано использование центрифугирования в градиенте плотности (Percoll) для обогащения популяций положительных по состоянию эмбрионального антигена (SSEA) -4 из выделенных hAEC перед культивированием [ 18 ].
    hAEC являются пластиковыми адгезивами и при культивировании легко прилипают к культуральной чашке без какого-либо питающего слоя или какой-либо специальной предварительной обработки культурального субстрата [ 25 ]. Было замечено, что hAEC не размножаются хорошо при низкой плотности, но реплицируются быстрее в течение более длительного периода при культивировании в средах с низким содержанием кальция [ 25 ].Кроме того, когда клетки культивируются в среде DMEM с добавлением 10% сыворотки и эпидермального фактора роста (EGF), клетки растут в течение 2–6 пассажей. Удаление EGF приводит к быстрому снижению пролиферации и, по-видимому, к терминальной дифференцировке [ 26 ]. Пролиферирующие hAEC демонстрируют нормальный кариотип [ 11 ] и среднее время удвоения 38,4 ч [ 27 ].
    Интересно, что после 5 дней культивирования становятся очевидными две фракции клеток; во-первых, это популяция адгезивных клеток, а во-вторых, непрочно прикрепленные клетки над адгезивными [ 11 ].При сборе этих двух фракций с помощью дифференциальной трипсинизации было обнаружено, что кластеры, оставшиеся в культуре над базальным слоем прикрепленных клеток, содержали больше клеток с характеристиками стволовых клеток, чем во фракции прилипших [ 11 ].
    2.1.2 Фенотипическая характеристика

    С точки зрения морфологического внешнего вида, hAEC в культуре образуют сливной монослой эпителиальных клеток в форме булыжника [ 21 , 22 ]. Что касается экспрессии маркеров, почти 100% hAEC положительны в отношении пан-цитокератина (СК) [ 28 ], маркеров, обычно используемых для дифференциации клонов эпителиальных и мезенхимальных клеток.Интересно, что есть сообщения о hAEC, экспрессирующих некоторые из мезенхимальных маркеров, а именно виментин [ 28 ] и альфа-актин гладких мышц (α-SMA) [ 29 ]. Молекулярное свидетельство истинного перехода эпителия в мезенхиму (EMT), которому подверглись культивированные hAEC (то есть повышенная экспрессия нескольких генов, связанных с EMT, таких как белок гомолог 1 улитки (Drosophila), матриксная металлопротеиназа (MMP) -9, ингибитор активатора плазминогена 1 и α-SMA), возможно, из-за аутокринной продукции hAEC трансформирующего фактора роста-β (TGF-β) [ 29 ].Что касается экспрессии других маркеров, свежевыделенные / наивные hAEC не являются гомогенно положительными для всех проанализированных маркеров. Сообщается, что hAEC присутствует с маркерами, обычно экспрессируемыми эмбриональными стволовыми клетками человека, а именно SSEA-3, SSEA-4, антигеном отторжения опухоли (TRA) 1-60 и TRA1-81, но не имеет экспрессии SSEA-1 [ 4 ]. Другие экспрессируемые маркеры включают крипто, FRL-1, criptic family 1, онтогенетический белок 3, связанный с плюрипотентностью, проминин 1, ген парного бокса (PAX) -6 [ 21 ] и GCTM2 [ 30 ], в то время как экспрессия forkhead box D3, фактор дифференцировки роста-3 и обратная транскриптаза теломеразы не наблюдаются [ 22 , 31 ].Наряду с этими маркерами, молекулярные маркеры плюрипотентных стволовых клеток, такие как октамер-связывающий белок (OCT) -4, SRY (область определения пола Y) -box 2 (SOX-2), Nanog, Lefty-A, фактор роста фибробластов (FGF) -4, также наблюдаются пониженная экспрессия белка-1 (REX-1) и фактора роста-1, производного от тератокарциномы [ 32 ]. Среди этих молекулярных маркеров OCT-4, который является одним из факторов транскрипции, который играет критическую роль в поддержании плюрипотентности и самообновления в недифференцированных клетках, экспрессируется в большинстве hAEC [ 28 ].
    Экспрессия мезенхимальных и гематопоэтических маркеров, таких как лейкоцитарный антиген человека (HLA) -A, HLA-B и HLA-C, кластер дифференцировки / обозначения (CD) 10, CD13, CD29, CD44, CD49e, CD73, CD90 (Thy -1), CD105, CD117 (c-kit), CD166 и поверхностный маркер стромальных клеток (STRO) -1; однако HLA-DQ, HLA-DR, CD14, CD34, CD45, CD49d оказались отрицательными [ 4 , 22 , 33 ]. Сообщалось о низкой экспрессии HLA-A, HLA-B и HLA-C сразу после выделения, которая неожиданно повысилась до значительного уровня в культуре [ 34 ].Аналогичным образом, первоначально сообщается, что экспрессия CD90 низкая, но после 6 дней культивирования примерно 50% клеток экспрессируют CD90 [ 28 ].
    Кроме того, hAEC демонстрирует экспрессию CD9, E-кадгерина (CD324), интегрина α 6 , интегрина β 1 , CD24, c-met и переносчика АТФ-связывающих кассет G2 (ABCG2 / BCRP) [ 35 ]. Экспрессия ABCG2 в hAEC указывает на то, что они могут обладать некоторыми свойствами, сходными с так называемой боковой популяцией гемопоэтических стволовых клеток, обнаруживаемых в костном мозге [ 28 ].
    Наряду с этими маркерами недифференцированные hAEC также демонстрируют экспрессию нервных клеток (декарбоксилаза глутаминовой кислоты, основной белок миелина, средняя цепь нейрофиламента, нейрон-специфическая энолаза, 2 ', 3'-циклический нуклеотид, 3'-фосфодиэстераза, протеолипидный белок / DM-20 , белок 2, связанный с микротрубочками (MAP2), киназа MAP2, глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP), белки нейрофиламентов), легкое (гомеобокс1 NK2, муцин, окклюдин, аквапорин-5, кавеолин-1), печень (альбумин, α-фетопротеин (FP), α-1-антитрипсин (AT), CK18, глутамин синтетаза, карбамоилфосфатсинтетаза-1, фосфоенолпируваткарбоксикиназа, цитохром (CYP) 2D6, CYP3A4, CYP2C9, транстиретин, тирозиновый ядерный фактор / α-гепатрансфераза CCAAT 3-α-гепатрансфераза энхансер, связывающий белок-α), кардиомиогенный (Gata-связывающий белок (GATA) -4, Nk2 homeobox5 (NKx 2.5), легкая цепь миозина (MLC) -2A, MLC-2V, регуляторная легкая цепь миозина-7, предсердный натрийуретический пептид (ANP), кальциевый канал, потенциал-зависимый, L-тип, альфа-1C-субъединица, потенциал-зависимый канал калия, Семейство Shal, член 3) и панкреатические (поджелудочная и дуоденальная гомеобокс 1 или PDX-1) маркеры клонов ассоциированы [ 22 ]. Наблюдались некоторые различия в процентном содержании клеток, экспрессирующих указанные маркеры, возможно, в зависимости от различного гестационного возраста [ 5 ] и различных условий культивирования, используемых разными группами, и размножения in vitro [ 13 , 36 , 37 ].Культивирование hAEC в бессывороточной среде привело к экспрессии гемопоэтических и моноцитарных маркеров, высокой теломеразной активности и удлинению теломер, тогда как hAEC, обычно культивируемые в среде с фетальной телячьей сывороткой, не содержали этих маркеров, а также не проявляли активности теломеразы [ 22 ].

    Очевидно, что стандартизация изоляции, а также протоколов культивирования необходима для получения единообразия в популяциях клеток, чтобы гарантировать точную интерпретацию данных экспериментов с использованием этих популяций клеток и обеспечить надежное сравнение результатов, полученных из различных исследовательских групп.


    2.1.3 Дифференциация

    С момента открытия hAEC несколько групп были сильно заинтересованы в изучении их потенциала дифференциации с надеждой использовать их в клинической / трансляционной медицине. Новаторские исследования Сакурагавы и его коллег показали, что hAEC экспрессируют нейрональные и глиальные маркеры, такие как нейрофиламент и MAP2, или GFAP [ 38 ], маркеры олигодендроцитов [ 39 ], синтезируют катехоламины из l-тирозина [ 40 ] и обладают способность превращать 3,4-дигидроксифенилаланин (1-ДОФА) в дофамин [ 41 ], что предполагает их потенциальное использование для лечения неврологических расстройств.После этого была исследована способность hAEC дифференцироваться в нервную (эктодермальную) ветвь как in vitro, так и in vivo.
    чАЕС, культивируемых в среде, содержащей добавки, в том числе -трансретиноевую кислоту и FGF-4, дифференцировались in vitro в направлении глиальных и нейрональных клеток [ 11 , 21 ]. Niknejad и его коллеги сообщили, что на способность hAEC экспрессировать маркеры нервных клеток при индукции нейральной дифференцировки in vitro влияют некоторые факторы, включая сыворотку, ноггин, основной-FGF и ретиноевую кислоту [ 19 ].Нервный и нейротрофический потенциал hAEC в условиях in vivo показал, что они могут способствовать нейрорегенерации / восстановлению при таких расстройствах, как болезнь Паркинсона, инсульт и повреждение спинного мозга. Например, hAEC, привитые к дофамин-денервированному стриатуму крысиной модели болезни Паркинсона с иммуносупрессией, выжили и улучшили нейроповеденческий дефицит [ 42 ]. Лю и др. трансфицировали hAEC, ранее инфицированные рекомбинантным лентивирусом для экспрессии нейротрофического фактора линии глиальных клеток, в мозг крыс с преходящей окклюзией средней мозговой артерии и наблюдали, что hAEC выживают и мигрируют в ишемическую область крыс, значительно улучшая поведенческие дисфункция и уменьшение объема инфаркта [ 43 ].В моделях животных с повреждением спинного мозга введение hAEC способствовало восстановлению двигательной функции задних конечностей; атрофия уменьшилась, и размер поврежденных нейронов частично восстановился [ 44 ]. Недавние предварительные результаты указывают на возможность использования чАЕС для лечения рассеянного склероза. Действительно, трансплантация hAEC в экспериментальную модель мышиного аутоиммунного энцефаломиелита (EAE) рассеянного склероза улучшила EAE и уменьшила инфильтрацию Т-лимфоцитов и моноцитов / макрофагов, а также демиелинизацию в центральной нервной системе [ 45 ].Аналогичные результаты, а также уменьшение воспаления центральной нервной системы, демиелинизации и дегенерации аксонов в спинном и головном мозге мышей были зарегистрированы при внутрибрюшинной инъекции hAEC на мышиной модели рассеянного склероза [ 46 ]. Сообщается, что кондиционированная среда, полученная из культивированных hAEC, проявляет нейротрофические эффекты на корковые клетки крыс [ 47 ].
    Также был исследован потенциал дифференцировки hAEC по отношению к клеткам энтодермального происхождения.Что касается дифференцировки печени, после того, как Сакурагава и его коллеги [ 48 ] впервые продемонстрировали, что альбумин и продуцирующие α-FP hAEC являются многообещающими переносчиками трансгена для аллогенной трансплантации в печень, в других работах поощрялось использование плацентарных клеток для восстановления функциональности печени. ткани. Takashima и его коллеги сообщили, что культивируемые hAEC, даже в отсутствие стимулов, дифференцирующих печень, экспрессируют несколько генов, связанных с гепатоцитами, и продемонстрировали продукцию альбумина, накопление гликогена и секрецию альбумина [ 49 ].Кроме того, сообщения о дифференцировке hAEC in vitro в отношении гепатоцитоподобных клеток были выдвинуты различными группами с использованием переменных факторов индукции [ 11 , 21 , 50 , 51 ].
    Несмотря на то, что нет четких отчетов о дифференцировке in vivo, многие исследования in vivo предоставляют доказательства, подтверждающие потенциальное применение hAEC в лечении заболеваний печени. Антифиброзный эффект hAEC был продемонстрирован путем трансплантации их на животную модель индуцированного CCl4 цирроза, что привело к приживлению клеток с уменьшением апоптоза гепатоцитов, воспаления и фиброза.Наблюдаемый терапевтический эффект трансплантированных hAEC, как сообщалось, был более вероятен из-за опосредованного hAEC снижения провоспалительных и профибротических цитокинов и индукции фенотипа, разрушающего коллаген [ 52 ]. Та же группа, использующая мышей, хронически травмированных длительным лечением CCl 4 , также сообщила, что чАЭК, привитые в поврежденную печень, приводят к значительным изменениям в количестве и фенотипе печеночных макрофагов, связанных со значительным уменьшением степени установленного фиброза [ 53 ].В другом исследовании hAEC были трансплантированы в печень мышей с иммунодефицитом, получавших реторсин, и после трансплантации были обнаружены в печени экспрессирующие зрелые гены печени, включая цитохромы, белки плазмы, переносчики и другие печеночные ферменты [ 50 ].
    Также был исследован потенциал дифференцировки hAEC по типу клеток поджелудочной железы. Дифференцировку поджелудочной железы индуцировали при культивировании hAEC в среде, содержащей никотинамид [ 11 ]. Дифференцированный hAEC показал экспрессию нижестоящих факторов транскрипции PAX-6, Nk2 homeobox2 и зрелых гормонов инсулина и глюкагона [ 11 ] вместе с образованием масс клеток с кистообразным видом, экспрессирующих маркер экзокринных клеток поджелудочной железы амилазу. 2B [ 21 ].Интересно, что трансплантация hAEC сообщила о снижении уровней гипергликемии у мышей с индуцированным стрептозотоцином диабетом, что указывает на потенциальное терапевтическое применение в будущем для лечения сахарного диабета I типа [ 54 , 55 ].
    Также сообщалось о способности hAEC дифференцироваться в направлении других типов клеток энтодермального клона. Moodley et al. продемонстрировали, что наивные hAEC дифференцируются в клетки с признаками пневмоцитов типа II через 2 недели после парентеральной инъекции в мышиной модели тяжелого комбинированного иммунодефицита (SCID) вызванного блеомицином повреждения легких.Пересаженные hAEC уменьшали воспаление и уменьшали фиброз после легочного повреждения [ 30 ]. Между тем, наша группа обнаружила, что трансплантация смеси клеток, полученных из амниотических и хорионических мембран, включая hAEC, иммунокомпетентным мышам, зараженным блеомицином, разными путями доставки, значительно снижает тяжесть фиброза легких; скорее всего, из-за паракринного действия, проявляемого растворимыми молекулами, которые они секретируют [ 56 ], а не дифференцировкой трансплантированных клеток, что подтверждается снижающим фиброз действием кондиционированной среды, генерируемой из клеток, полученных из амниотической мембраны, при доставке в одно и то же легкое. модель фиброза на животных [ 57 ].
    Кроме того, имеются сообщения in vitro, указывающие, что hAEC также обладают потенциалом мезодермальной дифференцировки. Например, сообщается, что наивные hAEC могут дифференцироваться в клетки с характеристиками адипоцитов мезодермального происхождения, остеоцитов [ 5 , 11 , 21 , 33 , 58 ] и хондроцитов [ 22 ]. Сообщалось также, что hAEC дифференцируется в сторону миогенной линии, сравнимой с MSC костного мозга [ 5 ].Дифференциация в отношении кардиомиоцитоподобных клеток была индуцирована при использовании среды с добавлением аскорбиновой кислоты, и после индукции наблюдалась экспрессия кардиоспецифических генов предсердного и желудочкового MLC 2 и факторов транскрипции GATA-4 и Nkx 2.5 [ 11 , 21 ]. Дифференцированные клетки экспрессировали тропонин Т и содержали Т-канальцы, многочисленные миофиламенты и миофибриллы, а также Н-полосы, характерные для относительно зрелых кардиомиоцитов [ 21 ].

    Взятые вместе вышеупомянутые доказательства указывают на способность hAEC дифференцироваться в отношении клеток всех трех зародышевых листков in vitro, в то время как нет убедительных доказательств их способности к дифференцировке in vivo.Тем не менее, несколько предварительных исследований, главным образом в области заболеваний печени и нервной системы, подтверждают их возможную роль в качестве эффективного терапевтического средства.

    .

    Передняя плацента (плацента впереди): что вы должны знать

    Плацента помогает транспортировать питательные вещества, кислород и кровь от матери к ребенку во время беременности. Он борется с внутренними инфекциями и способствует выработке гормонов для здоровой и безопасной беременности (1).

    Состояние и положение плаценты имеют значение для исхода беременности. В этом посте MomJunction мы расскажем вам о передней части плаценты и о том, как это положение может повлиять на вашу беременность.

    Что такое передняя плацента?

    Передняя плацента - это когда плацента прикрепляется к передней части матки, близко к брюшной стенке.

    Хотя плацента может прикрепляться в любом месте матки, обычно она развивается на задней (задней) стороне, близко к позвоночнику. В переднем положении плаценты большинство движений ребенка маскируется плацентой и может быть не обнаружено.

    Передняя плацента - редкое явление и более вероятно, если у вас ранее было кесарево сечение (2).

    Когда вы узнаете, есть ли у вас передняя плацента?

    Врач проверяет положение плаценты при сканировании на 20-й неделе, которое также называется «сканированием аномалий» (3). Расположение плаценты можно описать как:

    • Передняя часть : Имплантаты на передней стенке матки
    • Задняя часть : Имплантаты на задней стенке матки
    • Фундаментальная : Крепится к стенке матки верхняя часть стенки матки
    • Правая или левая боковая поверхность матки : Имплантаты на правой или левой стороне матки (4)
    • Предлежание плаценты : Плацента расположена над шейкой матки (отверстие матка).

    Влияет ли передняя плацента на вашу беременность?

    Передняя плацента не является поводом для беспокойства, но может затруднить некоторые вещи.

    1. Сердцебиение плода: Обычно вы можете впервые услышать сердцебиение ребенка между 10-й и 12-й неделями беременности (5). Его можно обнаружить с помощью ручного допплера или фетоскопа. В случае передней части плаценты это может быть сложно, поскольку плацента находится между слуховым аппаратом и плодом.
    1. Пинки и движения ребенка: Вы не можете чувствовать толчки и движения ребенка, поскольку плацента действует как подушка между вашим животом и маткой. В случае передней плаценты вы могли бы почувствовать приглушенные движения и отсроченные толчки по сравнению с задней плацентой.
    1. Положение ребенка: Поскольку движения невозможно надлежащим образом определить, определить положение ребенка может быть непросто.

    Это мешает вам узнать о развитии ребенка так же легко, как это могли бы сделать другие матери.И это раздражает!

    Влияет ли передняя плацента на рост и развитие ребенка?

    Передняя плацента не может повлиять на развитие или здоровье ребенка. Это может не иметь никакого значения для плода, пока он находится в плаценте.

    Влияет ли передняя плацента на роды?

    Есть вероятность нормальных родов даже с передней плацентой, если отверстие влагалища не закрыто. Даже в этом случае плацента отделяется от стенки матки и при необходимости удаляется и отправляется на анализ.

    Однако исследования показывают, что передняя плацента может увеличить потребность в стимуляции родов и кесаревом сечении. Это также может отсрочить начало родов. Также существует немного более высокий риск послеродового кровотечения (ПРК) во время родов через естественные родовые пути (6).

    Какие осложнения при наличии передней плаценты?

    Передняя плацента может не вызвать никаких осложнений во время беременности. Однако он может вызвать осложнения во время родов и родов, когда он растет к шейке матки, а не к матке.

    • Это может представлять опасность во время кесарева сечения. Положение плаценты может затруднить разрез, что приведет к сильному кровотечению во время родов. Следовательно, передняя плацента также может увеличить риск чрезмерного кровотечения во время вагинальных родов (6).
    • Позиционирование иглы может стать проблемой в случае амниоцентеза, что приведет к кровотечению и разрывам мембраны.
    • Женщины с передним расположением плаценты могут испытывать боль в пояснице (7).У вас могут развиться схватки в спине, то есть сильная боль в спине, возникающая при схватках во время родов.
    • Низко расположенная передняя часть плаценты может увеличить вероятность предлежания плаценты, которое может частично или полностью заблокировать шейку матки, увеличивая потребность в кесаревом сечении (8).
    • Передняя плацента над старым рубцом кесарева сечения может привести к приросшему плаценту (9), в результате чего плацента глубоко проникает в рубец, а также в стенку матки.
    • Когда ребенок находится в тазовом предлежании, ваш врач выполняет головное предлежание для плавных вагинальных родов.Но с передней плацентой может быть невозможно повернуть ребенка из ягодичного положения в положение с опущенной головой, особенно если это низкорасположенная передняя плацента (10).

    Ультразвук и МРТ могут помочь выявить вышеуказанные состояния, чтобы врач мог соответствующим образом спланировать кесарево сечение.

    Также известно, что передняя плацента увеличивает риск (8).

    • Гипертензия, вызванная беременностью
    • Гестационный сахарный диабет
    • Отслойка плаценты
    • Задержка внутриутробного развития
    • Внутриутробная смерть плода

    Эти риски для матери и ребенка могут быть редкими.Тем не менее, чтобы оставаться в безопасности, лучше проконсультироваться с врачом.

    Когда обратиться к врачу?

    Проверьте следующие признаки и симптомы, которые могут указывать на проблему с плацентой:

    • Сильные сокращения матки
    • Боль в животе
    • Вагинальное кровотечение
    • Сильная боль в спине

    Если вы пострадали от удара в живот во время падения или травмы, обратитесь к врачу. Эти травмы могут повлиять на здоровье плаценты и могут потребовать медицинского обследования.

    Помимо рекомендаций врача, несколько советов по уходу на дому также могут помочь сохранить здоровье плаценты.

    Домашний уход за передней плацентой

    Следующие меры помогут сохранить здоровье плаценты независимо от ее положения. Они также облегчат роды, сохраняя здоровье и матери, и ребенка.

    • Хорошо питайтесь для питания плаценты. Включите больше листовых зеленых овощей, цельнозерновых продуктов, орехов и полезных жиров. Сведите к минимуму употребление обработанных и соленых продуктов.
    • Увлажняйте себя, выпивая больше воды и соков. Плаценте требуется жидкость для отвода фетальных отходов.
    • Если вам разрешено заниматься физическими упражнениями, могут быть полезны быстрая ходьба, пренатальная йога и упражнения для мышц тазового дна. Примите меры предосторожности и не переусердствуйте (12).
    • Избегайте резких рывков корпусом - не плюхайтесь на диван и не падайте внезапно в инверсию с наклоном вперед. Сведите к минимуму резкие движения, такие как наклоны вперед или повороты.Во время путешествия пристегивайтесь ремнем безопасности.
    • Избегайте курения и употребления наркотиков, которые могут нанести вред вашей плаценте и плоду (13).

    Исследования передней плаценты

    • В ретроспективном турецком исследовании 500 здоровых беременных женщин было обнаружено, что масса тела при рождении у плодов с передней плацентой была выше по сравнению с нормальной плацентарной беременностью. Также было обнаружено, что частота возникновения передней плаценты выше в случае родов женского пола (14).
    • Другое исследование, проведенное в больнице общего профиля Абха в Саудовской Аравии, показало, что у большинства женщин с О-положительной группой крови была передняя плацента (8).
    • Положение во время сна во время зачатия также влияет на место имплантации плаценты, показало другое исследование, проведенное при одноплодной беременности на сроках от 15 до 20 недель (15).

    Созревание плаценты в зависимости от срока беременности объясняется с помощью подробной системы классификации, о которой мы поговорим далее.

    Оценка плаценты (классификация Grannum)

    Оценка плаценты - это классификация ультразвуковой морфологии плаценты на основе ее зрелости.Он отражает степень кальцификации в зависимости от срока беременности. Плацента подразделяется на четыре степени, от нулевой до трех (11).

    Класс 0:

    • Гестационный возраст: между концом первого триместра и началом второго триместра, то есть менее 18 недель.
    • Хорионическая пластинка прямая, гладкая, с четко очерченной сплошной плотной линией.
    • Вещество плаценты представляет собой однородную эхотекстуру без эхогенных участков.
    • Отсутствие эхогенности базального слоя

    Степень 1:

    • Гестационный возраст: от середины второго триместра до начала третьего триместра, то есть от 18 до 29 недель.
    • Это ранняя стадия созревания плаценты.
    • Хорионическая пластинка представляет собой четко выраженную непрерывную линию, которая может иметь мелкие неровности.
    • В веществе плаценты есть несколько беспорядочно разбросанных эхогенных участков.

    Класс 2:

    • Гестационный возраст: конец третьего триместра, то есть более 30 недель.
    • Хорионическая пластинка имеет более выраженные углубления.
    • Вещество плаценты разделено не полностью с линейной эхогенной плотностью.
    • Более крупные кальцификации присутствуют в базилярной пластине с конфигурацией «точка-тире».

    Класс 3:

    • Гестационный возраст: более 39 недель, т.е.э., когда плацента созрела.
    • Хорионическая пластинка имеет полные углубления.
    • Вещество плаценты разделено на отделы, разграничивающие семядоли.
    • Базальный слой плотнее и крупнее.

    Кальциноз, как указано выше, считается нормальным и здоровым. Однако существует вероятность преждевременной кальцификации в случае уже существующих состояний, таких как предлежание плаценты, высокое кровяное давление, диабет или анемия.Кальцификация никак не повлияет на развитие плода.

    Далее мы отвечаем на некоторые часто задаваемые вопросы о передней части плаценты.

    Часто задаваемые вопросы

    1. Может ли плацента перемещаться из переднего положения в заднее?

    Плацента не двигается после прикрепления или имплантации. Значит, он не может перейти из переднего положения в заднее.

    2. По-разному ощущаются ли сокращения передней плаценты?

    Поскольку передняя плацента может создавать амортизирующий эффект между плодом и стенкой матки, вы можете не почувствовать сокращений.Но сила сокращений такая же, как и при нормальном положении плаценты.

    3. Увеличивает ли передняя плацента ваш живот?

    Плацента в переднем положении, вероятно, уменьшит ваш живот, потому что она расположена ближе к брюшной стенке и сжимает лишнюю воду и части ребенка между внутренними органами.

    4. Может ли близнец спрятаться за передней плацентой?

    Может не быть шанса, что близнец прячется за плацентой.Однако это может быть возможно, если у близнецов одна и та же плацента и амниотический мешок. Здесь они расположены так близко, что их нелегко обнаружить при сканировании.

    5. Как мне спать, если у меня передняя плацента?

    Независимо от положения плаценты, вы должны выработать привычку спать на боку, что является удобным положением во время беременности. Лучше спать на левом боку, поскольку это может улучшить приток крови и питательных веществ к плаценте, плоду и матке (16).

    Передняя плацента не вызывает беспокойства. Любые риски, возникающие из-за передней плаценты, управляемы, если они диагностируются вовремя во время ультразвукового сканирования. Это обычное положение плаценты, с которым могут легко справиться опытные врачи. Все, что вам нужно сделать, это следовать советам врача и не допускать стресса. Кроме того, ешьте здоровую пищу, лучше спите, будьте счастливы и наслаждайтесь своим временем, поскольку оно особенное.

    Были ли у вас проблемы во время беременности из-за передней плаценты? Если да, поделитесь с нами своим опытом.

    Ссылки:
    .

    Выделение и увеличение мезенхимальных стволовых / стромальных клеток, полученных из ткани плаценты человека

    Процедура выделения плацентарных МСК обобщена в Рисунок 1. Три области анатомии плаценты, из которых были выделены МСК, выделены на Рисунок 2. Это децидуальная оболочка матери, а также в основном фетальные ткани хориональной пластинки и ворсинок хориона. Многие учебники, статьи и онлайн-ресурсы подробно описывают развитие и функциональную роль различных тканей плаценты (см. Ссылку 8 ).

    Морфология культур через 48 часов после выделения и удаления остатков ткани.
    После 48 часов культивирования МСК прикрепятся к пластику для тканевой культуры, в то время как эритроциты и большинство других клеточных остатков не прикрепятся. В это время среду необходимо заменить 35 мл свежей питательной среды. До этого обмена средой трудно проводить точные наблюдения из-за большого количества эритроцитов, которые затрудняют визуальную оценку. Внешний вид культурального супернатанта может существенно различаться у разных доноров плаценты.Это изменение можно увидеть визуально в примерах 1 и 2 (, рис. 3A, ). Эти два выделения МСК, которые оказались очень разными, были выполнены одновременно из двух разных плацент. Однако после промывания обе культуры выглядели одинаково (см. Промытый пример 3, , фиг. 3A ).

    Под микроскопом, после 48-часового обмена средой, только несколько клеток будут прикреплены к колбе ( Рисунок 3B ), и клетки будут выглядеть значительно отличными от более широко разросшихся МСК.Некоторые обломки и эритроциты будут видны как плавающие или прикрепленные комки, и они не будут мешать росту МСК. Более длинные фибробластические клетки, прикрепленные к дну колбы, вероятно, будут представлять собой смесь клеток, включая МСК, гематопоэтические, трофобластические или эндотелиальные клетки. Опять же, клетки, не являющиеся MSC, не подвергают опасности культуры MSC, поскольку эти клетки обычно не выживают более чем 1-2 пассажей в условиях культивирования MSC. Несмотря на некоторые различия в первоначальном внешнем виде культур, результаты последующего расширения в целом согласуются.

    Морфология культур МСК во времени.
    В этом репрезентативном примере через семь дней после выделения были видны небольшие фибробластные колонии MSC, хотя клетки, не относящиеся к MSC, также можно было увидеть как круглые или слабо прикрепленные клетки ( Рисунок 4A ) . Присоединенные клетки - это то, что первоначально было названо «колониеобразующей единицей-фибробластом» (CFU-F) 17 , а позже названо MSC 18 . Через тринадцать дней после выделения фибробластные колонии МСК были большими (, фиг. 4В, ).Как правило, монослой в этот момент будет сливаться на 80-90%, и клетки следует пассировать. Начиная со 2 пассажа, плацентарный монослой МСК будет развивать характерную водоворотную морфологию при слиянии (, рис. 4С, ). Если клетки не будут пассированы при низкой плотности, образование КОЕ-F больше не будет наблюдаться. При низкой плотности полученные из плаценты МСК имеют меньший квадратный вид, чем МСК 1 , полученные из костного мозга взрослых. В то время как происходящие из плаценты МСК и МСК костного мозга демонстрируют сходные скорости пролиферации, клетки, полученные из плаценты, менее склонны к быстрому старению 5 .

    Характеристика плацентарного MSC in vitro.
    Каждая увеличенная популяция клеток должна быть охарактеризована, чтобы гарантировать, что она соответствует стандартным критериям MSC 16 , включая (1) пластическую адгезию (2) наличие маркеров мезенхимальной поверхности и отсутствие маркеров кроветворной поверхности, и (3) способность подвергаться мезодермальной дифференцировке.

    Плацентарные МСК пластические адгезивные.
    Как показано на рис. 4 , МСК в культуре прилипают к пластику и имеют фибробластоподобную морфологию; это подтверждает, что ячейки соответствуют первым критериям, которые определяют MSC 16 .

    Плацентарный МСК отображает маркеры мезенхимальной поверхности.
    Второй определяющей характеристикой МСК является наличие маркеров мезенхимальной поверхности и отсутствие маркеров кроветворной поверхности 16 . Поскольку не существует единственного маркера, способного окончательно идентифицировать МСК, панели маркеров обычно используются в сочетании с анализом проточной цитометрии для идентификации клеток, которые являются мезенхимальными, но не гематопоэтическими. В представительном наборе данных, представленном здесь ( Рисунок 5A ), мы оценили клеточную экспрессию мезенхимальных маркеров CD73, CD105, CD90, CD146 и CD44, гематопоэтических маркеров CD45 и CD34, а также HLA-DR, а также эндотелиального маркера. CD31.Все антитела, используемые в этом процессе определения MSC плаценты, перечислены в Таблице материалов / оборудования . Окрашивание проводилось в соответствии с инструкциями производителя с описанными здесь методами анализа 19 .

    Клетки были положительными по мезенхимальным маркерам CD73, CD105, CD44 и отрицательными по маркерам клеточной поверхности CD45, CD34, HLA-DR и CD31, как ожидалось 5,20 . Приблизительно 37% и 57% клеток в нашем репрезентативном наборе данных были положительными по CD90 и CD146 21 соответственно.Как CD90, так и CD146 являются обычно используемыми маркерами MSC 21 . Профили маркеров на поверхности клеток МСК могут отличаться в зависимости от источника ткани МСК, состава среды или номера пассажа 22 . За время нашего многолетнего опыта мы не наблюдали долговременного заражения МСК из плаценты немезенхимальными клетками после 1-2 пассажей 5,11 .

    Плацентарные МСК демонстрируют потенциал мезенхимальной дифференцировки
    По определению МСК должны обладать in vitro способностью к мезодермальной дифференцировке 5,13 .Потенциал мезодермальной дифференцировки обычно оценивают с помощью тестов дифференцировки по трем или двум линиям. Анализы двух линий обычно оценивают способность к остеогенной и адипогенной дифференцировке, тогда как анализы трех линий дополнительно оценивают способность к хондрогенной дифференцировке. В представленных результатах, представленных здесь, мы показываем, что расширенные популяции МСК образуют как отложения кальция, свидетельствующие об остеогенной дифференцировке, так и липидные вакуоли, свидетельствующие о адипогенезе ( Рисунок 5B ).

    Чтобы охарактеризовать описанные здесь популяции МСК, мы высевали клетки в 24 лунки для культивирования в количестве 6 x 10 4 клеток в 1 мл индукционной среды. Компоненты среды перечислены в Таблице материалов / оборудования. Хотя составы индукционной среды распространены в литературе, опубликованные составы значительно различаются. По этой причине мы кратко перечисляем наши рецептуры индукционной среды и подходы к окрашиванию здесь. Среда для остеогенной индукции содержала DMEM-HG, 10% FBS, 1x раствор антибиотика антимикотика, 10 мМ β-глицеринфосфат, 100 нМ дексаметазон и 50 мкМ L-аскорбиновая кислота 2-фосфат.Среда для адипогенной индукции содержала DMEM-HG, 10% FBS, 1x раствор антимикотика антибиотика, 10 мкг / мл инсулина, 100 нМ дексаметазон, 200 мкМ индометацин и 500 мкМ 3-изобутил-1-метилксантин. Здесь культуры поддерживались в инкубаторе при 37 ° C, 5% CO 2 и культивировались в течение 14 дней. Среду для индукции меняли дважды в неделю в течение периода культивирования. После 14 дней индукции культуры были охарактеризованы либо на костный матрикс (остеогенез), либо на липидные вакуоли (адипогенез) в соответствии с нашей предыдущей публикацией 5 .Анализ отложений остеогенного кальциевого матрикса проводился путем аспирации среды, фиксации культур 4% параформальдегидом в течение 20 минут, промывания монослоя DPBS и затем окрашивания ализарином Red S в соответствии с инструкциями производителя. Индукцию адипогенности оценивали путем аспирации среды, фиксации культур 4% параформальдегидом в течение 20 минут, промывки монослоя и окрашивания раствором Oil Red O в соответствии с инструкциями производителя. Затем окрашенные отложения кальция и масляные вакуоли визуализировали с помощью светового микроскопа, а изображения сохраняли для использования в будущем.

    В предыдущих публикациях мы более подробно охарактеризовали потенциал дифференцировки плацентарных МСК 4,5 . Остеогенез MSC из плаценты аналогичен остеогенезу MSC из костного мозга, тогда как адипогенез, как правило, менее эффективен в MSC 5 из плаценты. Мы обычно не проводим хондрогенную дифференцировку по нескольким причинам, хотя ранее мы сообщали об этом для плацентарного MSC 5 . Во-первых, в то время как способность к мезодермальной дифференцировке является определяющей характеристикой MSC, она, вероятно, имеет второстепенное значение 23-25 ​​, особенно когда терапевтический эффект, вероятно, будет происходить от паракринных секреций MSC 26 .Во-вторых, хотя Dominici et al. предложил минимальные критерии для клинического производства MSC, полученных из костного мозга взрослого человека 16 , более поздние исследования показывают, что MSC из разных ниш имеют разные присущие свойства и возможности дифференциации 5,13,27-32 . Фактически, Parolini et al. предположил, что полученные из плаценты MSC должны дифференцироваться в «одну или несколько мезодермальных» ветвей, а не во все три линии 10 . Наконец, многие исследования МСК исключают хондрогенную дифференцировку, поскольку она происходит через аналогичный внутриклеточный сигнальный путь, как остеогенез (путь семейства TGFβ) 33-35 .

    Плацентарные МСК при использовании этого метода культивирования имеют материнское происхождение, несмотря на анатомическое расположение исходного материала.
    Во многих публикациях предполагается, что клетки, выделенные из хориона плода, дают фетальные МСК при культивировании 14 . Однако, как мы сообщали ранее 5 , все культуры, полученные из хориона плода, с использованием этого протокола, быстро обогащаются материнскими MSC, что интуитивно можно было бы ожидать для материнских децидуальных культур MSC. В этих репрезентативных результатах мы использовали плацентарную ткань младенцев мужского пола, чтобы можно было легко определить вклад эмбриональных и материнских клеток в увеличенные клеточные популяции.Для этих исследований мы использовали набор XY FISH, указанный в Таблице материалов / оборудования , и следовали инструкциям производителя.

    В представленных данных, представленных здесь, культуры, полученные из материнской децидуальной оболочки, составляли ~ 90% материнских клеток (XX) и ~ 10% плодных клеток (XY) при пассаже 0 ( Рисунок 6 ). При пассаже 2 популяции клеток, происходящие из материнских тканей, составляли ~ 100% материнских клеток (XX), а фетальные клетки (XY) не определялись. Это предполагает, что физическое рассечение материнской ткани привело к обогащению материнских клеток в последующих культурах.Тем не менее, очень важно учитывать результаты культивирования ворсинок хориона плода и культур, полученных из хорионической пластины. При пассаже 0 культуры, полученные как из ворсинок хориона плода, так и из хориональной пластинки, имели ~ 85% XY или фетального происхождения, что указывает на то, что целевое рассечение обогащено фетальными клетками (, фиг. 6, ). При пассаже 0 обе культуры содержали ~ 15% загрязнения материнскими клетками (XX). Удивительно, но при пассаже 2 обе культуры плода были заселены ~ 100% материнскими клетками (XX), и клетки плода (XY) больше не определялись.Анализ XY FISH показывает, что материнские клетки (ХХ-хромосомы) быстро и последовательно захватывают культуры, полученные из тканей хориона плода. Это важное культурное наблюдение, которое часто упускается из виду 5 . Детали этого анализа включены в этот протокол, потому что он демонстрирует очень важное наблюдение, что материнские клетки быстро заселяют все культуры, когда DMEM с добавлением 10% FBS используется без дополнительных факторов, предназначенных для поддержки популяций, полученных из плода.


    Рисунок 1: Краткое изложение процедуры выделения плацентарных МСК. ( Step 1 ) Ориентируйтесь по анатомии плаценты. ( Шаг 2 ) Вручную рассеките 10 г ткани децидуальной оболочки, ворсинок хориона или пластинки хориона с помощью ножниц. ( Шаг 3 ) Ножницами или скальпелем измельчите рассеченные части децидуальной оболочки, ворсинок хориона или тканей хориональной пластинки на мелкие кусочки.
    (, шаг 4, ) Освободите клетки от мелких кусочков путем расщепления в течение 1-2 часов диспазой и коллагеназой I.
    ( Step 5 ) Отделите клетки от фиброзной ткани путем импульсного центрифугирования и / или промывки их через фильтр для клеток. Собирают и ресуспендируют клетки в культуральной среде и помещают в культуральные колбы. Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

    Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) будут отобраны на основании их склонности к прилипанию к пластику и способности выживать и размножаться в культуральной среде. Наконец, в разделе результатов расширенный MSC может быть охарактеризован и сохранен для использования в будущих экспериментах.


    Рис. 2: Анатомия плаценты и тканей, выделенных в ходе этой процедуры. Первой собираемой тканью является децидуальная оболочка матери. Децидуальная оболочка - это ткань, которая остается тонким слоем на поверхности плаценты после отделения от стенки матки (децидуальная оболочка обозначается зелеными маркерами). Вторая ткань, которая будет взята из внутренней части плаценты, - это ворсинки хориона плода (синие маркеры). Третья ткань, подлежащая забору, - хорионическая пластинка плода (красные маркеры) (адаптировано из справочного материала 36 ).Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.


    Рис. 3. Морфология культур через 48 часов после выделения и удаления остатков ткани. ( A ) Внешний вид культурального супернатанта может существенно различаться между донорами плаценты до смывания остатков. Примеры культур 1 и 2 демонстрируют эту вариацию. Эти два выделения были выполнены одновременно, но из двух разных плацент. После промывания культуры будут очищены от эритроцитов и остатков тканей, как показано в примере 3.Последующие результаты расширения в целом согласуются. ( B ) После 48-часового обмена средой только несколько клеток будут прикреплены к колбе. Масштабная линейка = 200 мкм. Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.


    Рис. 4. Морфология культур МСК во времени. ( A ) Через семь дней после выделения видны небольшие фибробластные колонии MSC, хотя клетки, не относящиеся к MSC, также будут присутствовать в виде круглых или слабо прикрепленных клеток. ( B ) Через 13 дней после выделения фибробластные колонии МСК имеют большие размеры, и часто монослой МСК сливается и готов к пассажу.( C ) Начиная с пассажа 2 и далее, монослой MSC при слиянии приобретает характерную водоворотную морфологию. Масштабная линейка = 200 мкм. Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.


    Рисунок 5: Характеристика МСК с помощью проточной цитометрии и мезодермальной дифференцировки. ( A ) MSC, полученные из ворсин хориона плаценты, демонстрируют классический профиль маркеров MSC по данным анализа проточной цитометрии, хотя для этих маркеров клеточной поверхности экспрессия одинакова для всех типов MSC человека.Каждая гистограмма показывает интенсивность сигнала (ось x) в сравнении с нормализованным количеством ячеек на оси y (% от макс.). В этом репрезентативном наборе данных клетки были положительными по CD73, CD105 и CD44 и отрицательными по гематопоэтическим маркерам CD45, CD34 и HLA-DR. ( B ) Плацентарные МСК обычно подвергаются сильной остеогенной дифференцировке, однако ( C ) адипогенная дифференцировка может быть менее эффективной, чем МСК костного мозга. Изображения в подписях B и C были сделаны с 40-кратным увеличением.Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.


    Рис. 6: Плацентарные МСК имеют материнское происхождение при использовании этого метода культивирования, несмотря на анатомическое расположение исходного материала. Графики показывают количественную оценку клеточного состава плода (мужской, XY) и материнского (женский, XX) в культурах плацентарных МСК, выделенных из децидуальной ткани, ворсинок хориона и тканей хорионической пластинки при каждом втором пассаже. Материнские клетки (XX) быстро и воспроизводимо захватывают культуры, полученные из тканей хориона плода.Плод = мужские = XY хромосомы, обнаруженные в отдельной клетке, материнские = женские = XX хромосомы, обнаруженные в отдельной клетке. Представленные здесь данные были получены от N = 3 независимых донорских плацент от младенцев мужского пола, при этом минимум 100 клеток были окрашены на XY FISH и подсчитаны для каждой точки данных. Столбцы представляют собой средние значения, а столбцы ошибок отражают одно стандартное отклонение. Щелкните здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

    .

    Разделение клеток и изоляция клеток: методы, методы, приложения


    Клеточная биология сложна, учитывая множество переменных, которые исследователи должны знать и учитывать, чтобы получить значимые результаты. Проведение экспериментов на изолированной популяции клеток, а не на гетерогенной смеси клеток, является распространенным подходом к снижению сложности эксперимента. Это позволяет клеточным биологам уверенно относить наблюдаемые эффекты и реакции к определенному типу клеток.Таким образом, владение основными методами выделения клеток - ценный навык для любого клеточного биолога. Вот все, что вам нужно знать о разделении клеток.


    Что такое разделение клеток?

    Разделение клеток, также обычно называемое изоляцией клеток или сортировкой клеток, представляет собой процесс выделения одной или нескольких конкретных популяций клеток из гетерогенной смеси клеток. Существует ряд доступных методов разделения клеток, каждый из которых имеет свои плюсы и минусы.



    Как ученые готовят образцы для разделения клеток?

    Есть много разных способов подготовить образцы для оптимального выделения клеток. Выбор метода зависит от исходного образца и может включать удаление из него определенных элементов или просто создание суспензии отдельных клеток.

    Разделение клеток может быть выполнено на различных сложных биологических образцах, в том числе:


    Выделить клетки из крови

    Подробный обзор методов выделения различных популяций клеток из образцов крови.

    Узнать больше>

    Изоляция клеток из тканей

    Методы выделения клеток из таких тканей, как селезенка и лимфатические узлы.

    Узнать больше>

    Какие методы и методы разделения клеток доступны?

    Есть много разных способов выделения клеток из сложных биологических образцов. Общие характеристики, используемые для выделения клеток, включают размер клеток, плотность клеток, форму клеток и экспрессию поверхностных белков.Наиболее распространенные методы разделения ячеек включают:

    Существуют также менее часто используемые методы разделения клеток, в том числе сортировка клеток с активацией плавучести, выделение клеток на основе аптамеров, истощение комплемента и многое другое.

    Посмотреть все методы разделения клеток>


    Выбор метода разделения клеток, отвечающего вашим исследовательским потребностям

    Узнайте больше о методах разделения ячеек, описанных выше, чтобы выбрать лучший метод для вашего приложения.

    Сравнить методы>

    Некоторые методы могут использоваться в комбинации для повышения эффективности и улучшения характеристик изоляции ячеек. Например, клетки могут быть предварительно обогащены с использованием иммуномагнитного разделения клеток перед сортировкой клеток, активируемой флуоресценцией (FACS). Это может быть особенно полезно при выделении популяций редких клеток (например, предварительное обогащение врожденных лимфоидных клеток (ILC) до сортировки по потоку) или конкретных подмножеств в пределах данной популяции.


    Как выбрать лучший метод разделения клеток для исследования?

    Существует несколько факторов, которые можно использовать для определения того, какой метод выделения клеток использовать. В зависимости от предполагаемого последующего применения изолированных клеток, ученые должны учитывать производительность (т.е. чистоту и извлечение) и эффективность метода разделения клеток, а также жизнеспособность и функцию изолированных клеток.

    Производительность

    Ключевыми показателями эффективности методов разделения клеток обычно являются чистота и извлечение.

    • Чистота относится к доле желаемых клеток в конечной фракции выделенных клеток и обычно выражается в процентах от общего числа живых клеток. Чистоту обычно измеряют с помощью проточной цитометрии. Он показывает, может ли конечная выделенная популяция клеток в достаточной степени отражать характеристики этого конкретного типа клеток без мешающего воздействия других типов клеток.
    • Recovery отвечает на вопрос: из всех желаемых ячеек, которые вы можете получить из своего образца, сколько вы действительно можете выделить? И наоборот, сколько желаемых клеток вы потеряли из-за метода разделения клеток? Узнайте, как оценить восстановление после процедур выделения клеток>

    Жизнеспособность и функции

    Жизнеспособность и функция изолированных клеток важны, когда исследователям нужны живые, очищенные клетки для последующей клеточной культуры и других приложений.

    • Жизнеспособность может быть выражена как процент живых клеток в изолированном образце.
    • Функция клеток, которые вы изолируете, должны сохраняться на протяжении всего процесса разделения клеток, чтобы ваши последующие анализы точно отражали физиологическую функцию интересующего типа клеток.

    КПД

    Ученые часто работают сверхурочно и работают над несколькими проектами одновременно.Выбор эффективных методов поможет вам преодолеть потребности научных исследований и достичь большего за меньшее время. Пропускная способность, скорость, простота использования и автоматизация - все это важные переменные, которые следует учитывать для максимальной эффективности изоляции вашей ячейки.

    • Пропускная способность относится к скорости, с которой может быть выполнено разделение ячеек с точки зрения объема выборки, количества ячеек или количества выборок. Если вы работаете с большими объемами образцов или с несколькими образцами одновременно, вам нужно подумать, какая технология разделения клеток может поддерживать желаемую производительность.
    • Скорость означает время, необходимое для завершения процедуры изоляции ячейки. Более быстрые протоколы разделения ячеек желательны, если вам нужно увеличить пропускную способность и добиться большего, проведя время в лаборатории. Некоторые из самых быстрых наборов для выделения клеток позволяют выделить высокоочищенные клетки всего за 8 минут.
    • Простота использования способствует надежности и воспроизводимости метода разделения клеток. Простые протоколы являются ключом к сокращению ошибок и изменчивости, вызываемых пользователем.
    • Автоматизация может уменьшить изменчивость, ограничить количество необходимого рабочего времени и позволить вам больше тратить время в лаборатории. Инструменты автоматического разделения клеток также снижают риск воздействия опасных патогенов при работе с потенциально инфекционными образцами.

    Критерии оценки методов разделения клеток

    Есть много параметров, которые вы можете учитывать при выборе правильного метода выделения клеток для вашего исследования.

    Посмотреть больше параметров>

    Эффективные технологии разделения клеток

    Мы рекомендуем вам выбрать технологии разделения клеток, которые помогут вам максимизировать эффективность, предоставив вам высокоочищенные, функциональные клетки, необходимые для ваших исследований. Более умные и продуманные технологии позволят вам добиться большего, проведя время в лаборатории.

    Ниже приведены некоторые из технологий изоляции клеток, которые мы разработали с расчетом на эффективность:

    EasySep ™ Иммуномагнитное отделение клеток

    Изолируйте клетки с помощью простой заливки всего за 8 минут.

    Узнать больше>

    Автоматическое иммуномагнитное разделение клеток RoboSep ™

    Изолируйте клетки до 16 образцов одновременно с минимальными затратами времени.

    Узнать больше>

    Изоляция клеток иммунной плотности RosetteSep ™

    Изолируйте подмножества клеток человека непосредственно из цельной крови во время центрифугирования в градиенте плотности.

    Узнать больше>

    Изолирующие трубки SepMate ™ PBMC

    Изолируйте PBMC всего за 15 минут.

    Узнать больше>

    .

    Смотрите также